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btx362237729

金虫 (正式写手)


[交流] 求助:纯化蛋白遇到包涵体了,尿素怎么用?

纯化大肠杆菌重组蛋白,遇到包涵体了,超声裂解不能澄清,离心后蛋白全在菌体沉淀里面

低温诱导貌似没什么效果。。。。。。请问大家用什么方法释放出来包涵体呢?

有人用8M尿素处理超声成功破裂包涵体

我的问题是,8M的尿素怎么去掉呢?我们的蛋白是GST标签的,是打算用GST琼脂糖柱子纯化的。。。。我不知道8M的尿素对柱子有没有什么影响呢?
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btx362237729

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励应助。 2011-10-04 18:51:31
复性缓冲液的浓度分别为:4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。

复性缓冲液:PBS 1mmol/LEDTA +尿素

抱歉这个浓度没看懂呢,是指的尿素的浓度吗?

听说尿素处理后GST标签蛋白的结构被破坏得很严重,复性效果也不好,不知道是不是真的?

复性就指去除尿素,然后蛋白质自己折叠?导师说我们这个蛋白就是个直的,不需要折叠,那么主要就要复性GST了
4楼2011-10-04 13:30:32
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btx362237729

金虫 (正式写手)


引用回帖:
5楼: Originally posted by 18853850850 at 2011-10-04 15:09:14:
上面的浓度是尿素的浓度,去除尿素之后蛋白就会按照最稳定的形态去折叠,主要是而二硫键的作用,GST标签很大,你的蛋白是直的,也有天然构象,要去除尿素。谢谢你有金币。

复性的过程太费时间了
6楼2011-10-04 22:43:30
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btx362237729

金虫 (正式写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by 18853850850 at 2011-10-05 09:11:47:
可是你不用管,过段时间换液就行了

我试试不复性直接挂柱子看能不能行。。。我用的3M尿素试试  哎
8楼2011-10-05 13:28:34
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btx362237729

金虫 (正式写手)


引用回帖:
9楼: Originally posted by youngker918 at 2011-10-05 20:10:50:
你可以先透析去除尿素再过柱子的

恩啊 也许只能这样干了。。。。。。。。。
10楼2011-10-05 23:45:35
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btx362237729

金虫 (正式写手)


引用回帖:
4545822楼: Originally posted by rhguo at 2012-04-27 17:17:53:
低温诱导可溶性表达的确不靠谱,我都到24度了,包涵体里面的还是非常浓,上清非常少

24度真的不算低。。。我最终15度。。。出来了很多
12楼2012-04-27 19:11:10
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btx362237729

金虫 (正式写手)


引用回帖:
4546852楼: Originally posted by rhguo at 2012-04-28 13:09:07:
15度,这也太夸张了吧,这么低温度,诱导时间呢?

诱导14小时
16楼2012-05-12 21:34:00
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