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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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madengyu

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madengyu

禁虫 (小有名气)

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2楼2011-08-31 08:59:17
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 2011-08-31 11:00:12
madengyu(金币+2): 2011-09-01 07:30:03
我记得我回复过你的主题,楼主你肿么还在菌液PCR。。。不嫌麻烦吗?

还有按照说明书上的体系。。。说明书只是一个参考。。。25ul中模板和dNTP加太多了。

非特异性条带太太多了。。。你可以设置一个温度梯度扩增一下你当时的基因,56度貌似不是最好的退货温度吧?
先减少非特异性条带再做PCR验证吧。。。
即便你现在电泳图上有你的目的条带,又很亮,但是你能说明什么问题呢?别的条带怎么解释?难道都是非特异性?不足以说服人。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-08-31 09:41:29
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lalafeng

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 11:00:24
Marker只是一个初步确定尺标,不是那么精确,Marker跑的两条邻近带大小与两条带之间的距离并不是成正比的,两种Marker跑的位置有偏差有多种原因:
1.点的样量是否一样多
2.制的胶是否均匀。。。暂时就想到这些。加油哦
充实每一天,学会自控
4楼2011-08-31 09:57:37
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-31 11:00:32
(1)提高退火温度到60以上一步步试试
(2)冷启动Taq酶,PCR提高特异性
(3)不行就提质粒,天使正解!酶切验证
5楼2011-08-31 10:03:57
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

菌液PCR本来就不是很特异,对有疑似目的片段的进行提质粒,酶切,测序鉴定是王道!
6楼2011-09-03 17:06:34
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380218013

金虫 (小有名气)

小弟个人意见:够质粒的话,跟普通的PCR目的是不一样。够质粒我们只有求有条带就可以,不管他是否有扎带,菌液PCR之后小抽,在酶切鉴定一次就好,只要求有。

至于MAKER 他也只是一个大概,并不是准确的,很多时候只要有条带送出去测序,就是对的。。
好好生活,努力赚钱
7楼2011-09-03 21:46:48
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