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madengyu

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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-31 08:54:22
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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2楼2011-08-31 08:59:17
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 2011-08-31 11:00:12
madengyu(金币+2): 2011-09-01 07:30:03
我记得我回复过你的主题，楼主你肿么还在菌液PCR。。。不嫌麻烦吗？

还有按照说明书上的体系。。。说明书只是一个参考。。。25ul中模板和dNTP加太多了。

非特异性条带太太多了。。。你可以设置一个温度梯度扩增一下你当时的基因，56度貌似不是最好的退货温度吧？
先减少非特异性条带再做PCR验证吧。。。
即便你现在电泳图上有你的目的条带，又很亮，但是你能说明什么问题呢？别的条带怎么解释？难道都是非特异性？不足以说服人。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-08-31 09:41:29
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lalafeng

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 11:00:24
Marker只是一个初步确定尺标，不是那么精确，Marker跑的两条邻近带大小与两条带之间的距离并不是成正比的，两种Marker跑的位置有偏差有多种原因：
1.点的样量是否一样多
2.制的胶是否均匀。。。暂时就想到这些。加油哦
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充实每一天，学会自控
4楼2011-08-31 09:57:37
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-31 11:00:32
（1）提高退火温度到60以上一步步试试
（2）冷启动Taq酶，PCR提高特异性
（3）不行就提质粒，天使正解！酶切验证
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5楼2011-08-31 10:03:57
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)
菌液PCR本来就不是很特异，对有疑似目的片段的进行提质粒，酶切，测序鉴定是王道！
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6楼2011-09-03 17:06:34
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380218013

金虫 (小有名气)
小弟个人意见：够质粒的话，跟普通的PCR目的是不一样。够质粒我们只有求有条带就可以，不管他是否有扎带，菌液PCR之后小抽，在酶切鉴定一次就好，只要求有。

至于MAKER 他也只是一个大概，并不是准确的，很多时候只要有条带送出去测序，就是对的。。
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好好生活，努力赚钱
7楼2011-09-03 21:46:48
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