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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR，求助。
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姜大磊

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR，求助。 已有8人参与

小弟最近做了一次菌液PCR。 T载体转到大肠感受态之后，LB长出菌落，对菌落摇菌，然后菌液PCR，出来了几个大小不到2000bp的条带（符合要求），但是我提取质粒去测序之后，结果却是空载，（T载体大约2700左右bp）这是怎么回事呢？请各位大侠指教。
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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
1楼 2010-05-15 08:39:04
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):good idea！:tiger37: 2010-05-15 12:47:00
菌液pcr时，作为模板DNA的既有质粒也有宿主菌的DNA，但宿主菌DNA比质粒打多了，可能是引物结合到了宿主菌DNA模板上了。因为是空载体所以你摇菌是抗性是正确的。你可以用不含载体的宿主菌做个对照看一下。
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2楼2010-05-15 09:00:53
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提取的质粒应该分出来一部分做个酶切检测一下。
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3楼2010-05-15 09:22:06
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王雨云

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提完质粒检测没？说不定没提出来呢！
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4楼2010-05-15 10:25:12
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-15 14:34:33
能导致PCR假阳性的东西很多，建议把菌液再做PCR检测一下，然后换一家公司测序
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5楼2010-05-15 11:04:18
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-15 12:47:17
菌落PCR假阳性也很多的，如果你的引物与宿主菌基因组里有匹配，PCR时也会以此为模板扩增出条带的。所以提质粒后酶切验证一下。
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
6楼2010-05-15 11:06:54
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切检测比较好
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7楼2010-05-17 02:26:05
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有转进去目的片段
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牛~逼~哄~哄
8楼2010-05-17 08:37:57
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR不具备说服性,一定要酶切验证~
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9楼2010-05-17 11:36:12
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