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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 就是急急急。P了N久的未知基因。请帮忙！！！！！！
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photobiology

金虫 (正式写手)

[求助] 就是急急急。P了N久的未知基因。请帮忙！！！！！！

本小硕一直在扩增一个未知基因片段，该片段中GC含量很高，80%左右，用KOD和LA分别做过梯度PCR，虽然有特异性的条带，但不是目的片段。引物分别尝试过22bp和30bp左右的，但都没有结果。
急急急急，我已经为这个纠结好久了，我要毕业哇。请各位高手给予指导，谢谢了。
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1楼2011-07-03 21:20:06
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muchongchong838

禁虫 (正式写手)
photobiology(金币+10): 你好，我看到了你的回复，在此向您请教。。。。 2011-07-04 21:45:04
本帖内容被屏蔽
2楼2011-07-04 11:40:18
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langjian268

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

photobiology(金币+10): 谢谢谢谢，，，我应该试一下这个。。。 2011-07-04 21:43:54
buffer 换成GC buffer试一下
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3楼2011-07-04 12:00:53
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

photobiology(金币+10): 谢谢，我回去试一下这个。。。。 2011-07-04 21:43:27
体系里加点DMSO。。。
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4楼2011-07-04 12:26:17
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

photobiology(金币+10): 谢谢你的建议，我会多试试的，要有其他问题再向你们讨教。。。。 2011-07-04 21:43:08
引物没问题的话那先换酶，那么多高保真酶呢干嘛非认准KOD的啊，又不好用。
不过针对高GC的模板如果不想用特殊的酶楼上的是方法是比较有效的手段。
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5楼2011-07-04 14:37:41
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nickychen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有专门扩高GC的盒子
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6楼2011-07-04 16:27:55
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

photobiology(金币+10): 谢谢你的指导，我会参考各位高手的意见试试的。。。 2011-07-04 21:42:34
GC含量这么高，为什么要用高保真酶？普通的片段有时候用高保真酶都扩增不出来。我以前用PCR mix扩增，也没有出现过什么错误。不知道你要扩的片段是多长的？
正如楼上的虫友所说，要用GC Buffer。
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7楼2011-07-04 17:10:16
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