[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事已有4人参与

Originally posted by original900 at 2011-07-21 15:16:02:
请问楼主构建的两个脂肪酶重组质粒，这两个质粒中的脂肪酶基因是从什么菌株中获取的，有什么特殊性质吗？我也在构建脂肪酶基因工程菌，所以有此一问！

7楼: Originally posted by bmby at 2011-11-04 17:49:34:
从环境土壤宏基因组中克隆的话，是先建文库筛选吗？
你是怎样设计克隆引物的？
最近也在做这个，希望能向你学习下。

9楼: Originally posted by bmby at 2011-11-05 09:14:33:
是说设计全长基因两端的引物。
你应该是先测序，再根据序列设计引物吗？

11楼: Originally posted by bmby at 2011-11-05 12:36:39:
扩增的基因如果和你测序序列不一样，需要突变回去吗？
你用的什么载体？可溶性蛋白量大吗？酶活呢？
大肠杆菌表达会形成难溶的蛋白或者无活性的包涵体，怎样避免这种问题？
是将脂肪酶基因突变改造一下吗，还 ...

15楼: Originally posted by bmby at 2011-12-19 10:16:11:
楼主在吗？
克隆出来的基因，怎样认定它是一个新型脂肪酶基因？
NCBI中无序列、没相关文章发表的可以肯定是新的，但是比对有80%左右的相似性可以认为是新的吗？或者说有没有具体的数值指标？

17楼: Originally posted by bmby at 2011-12-31 12:28:52:
楼主，我的实验又出状况了

我设计的引物以宏基因组DNA为模板扩增时得不到想要的序列。。
有其他较短的序列可以扩出，而且量很大，试过退火温度梯度，但是我的目的序列一直未出现。

紧急求助！！
我已经 ...