10楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 09:59:45:
是的，先测序后再设计全长引物，在引物两端加上酶切位点，扩增出我的目的基因后，然后去连接其他载体进行表达

11楼: Originally posted by bmby at 2011-11-05 12:36:39:
扩增的基因如果和你测序序列不一样，需要突变回去吗？
你用的什么载体？可溶性蛋白量大吗？酶活呢？
大肠杆菌表达会形成难溶的蛋白或者无活性的包涵体，怎样避免这种问题？
是将脂肪酶基因突变改造一下吗，还 ...

12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 13:48:53:
你扩增基因的时候用高保真性好的酶几乎是不会突变的。我用PET21a表达的，BL21DE3，蛋白可溶性很大，还可以胞外分泌，酶活也很高的。其实与酶的本身性质关系比较大，有的很好表达，有的就很难表达，我有很多条与我 ...

14楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-07 10:42:27:
祝实验顺利

15楼: Originally posted by bmby at 2011-12-19 10:16:11:
楼主在吗？
克隆出来的基因，怎样认定它是一个新型脂肪酶基因？
NCBI中无序列、没相关文章发表的可以肯定是新的，但是比对有80%左右的相似性可以认为是新的吗？或者说有没有具体的数值指标？

10楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 09:59:45:
是的，先测序后再设计全长引物，在引物两端加上酶切位点，扩增出我的目的基因后，然后去连接其他载体进行表达

17楼: Originally posted by bmby at 2011-12-31 12:28:52:
楼主，我的实验又出状况了

我设计的引物以宏基因组DNA为模板扩增时得不到想要的序列。。
有其他较短的序列可以扩出，而且量很大，试过退火温度梯度，但是我的目的序列一直未出现。

紧急求助！！
我已经 ...