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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5, BioEPI+1): 鼓励交流 2011-12-21 12:43:24
引用回帖:
11楼: Originally posted by bmby at 2011-11-05 12:36:39:
扩增的基因如果和你测序序列不一样,需要突变回去吗?
你用的什么载体?可溶性蛋白量大吗?酶活呢?
大肠杆菌表达会形成难溶的蛋白或者无活性的包涵体,怎样避免这种问题?
是将脂肪酶基因突变改造一下吗,还 ...

你扩增基因的时候用高保真性好的酶几乎是不会突变的。我用PET21a表达的,BL21DE3,蛋白可溶性很大,还可以胞外分泌,酶活也很高的。其实与酶的本身性质关系比较大,有的很好表达,有的就很难表达,我有很多条与我这条已表达的同源性在60%以下,表达就全是包涵体,换酵母以及采用分子伴侣等方法也试过,几乎可溶性都很低的,我觉得突变的话也可以,前段时间做过易错PCR,但觉得效果不太明显
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
12楼2011-11-05 13:48:53
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