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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于裂解BL21(DE3)细菌的问题
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 关于裂解BL21(DE3)细菌的问题 已有1人参与

最近用BL21(DE3)表达蛋白，不知道如何裂解细菌。想请教一下裂解BL21的裂解液都是通用的吗？还是说会随着导入质粒的不同而不同？我看了一些帖子，说是PBS重悬后超声破壁就可以了，我们用的是加入裂解液后37°摇半小时，然后-20°半小时，37水浴5分钟，后两步重复几次，然后100°煮5分钟，试验了几种裂解液，似乎效果都不太好，上清目标条带很淡，沉淀很浓，是上样的蛋白浓度太高了？还是说我们的蛋白都成了包涵体在沉淀中？谢谢
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1楼 2015-09-23 10:10:08
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们一直是用超声和高压破碎。你超声破壁是在低温下进行的么
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2楼2015-09-23 10:17:53
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-09-23 10:17:53
我们一直是用超声和高压破碎。你超声破壁是在低温下进行的么

我们实验室还没买超声破碎仪，不过看文献都是4℃低温下超声的。我主要想问的是裂解液是否随着导入的重组质粒不同而不同，还是BL21都可以用同一种裂解液？
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3楼2015-09-23 10:59:08
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