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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 关于裂解BL21(DE3)细菌的问题 已有1人参与

最近用BL21(DE3)表达蛋白,不知道如何裂解细菌。想请教一下裂解BL21的裂解液都是通用的吗?还是说会随着导入质粒的不同而不同?我看了一些帖子,说是PBS重悬后超声破壁就可以了,我们用的是加入裂解液后37°摇半小时,然后-20°半小时,37水浴5分钟,后两步重复几次,然后100°煮5分钟,试验了几种裂解液,似乎效果都不太好,上清目标条带很淡,沉淀很浓,是上样的蛋白浓度太高了?还是说我们的蛋白都成了包涵体在沉淀中?谢谢
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-09-23 10:17:53
我们一直是用超声和高压破碎。你超声破壁是在低温下进行的么

我们实验室还没买超声破碎仪,不过看文献都是4℃低温下超声的。我主要想问的是裂解液是否随着导入的重组质粒不同而不同,还是BL21都可以用同一种裂解液?
3楼2015-09-23 10:59:08
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们一直是用超声和高压破碎。你超声破壁是在低温下进行的么
2楼2015-09-23 10:17:53
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