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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么pKD46一直没法转进BL21(DE3)菌种
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stickforver

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么pKD46一直没法转进BL21(DE3)菌种

最近在做Red重组实验，想用Red重组系统敲除BL21(DE3)中的一个基因，可是实验中发现pKD46一直没法转进BL21(DE3）中，本人用过化转也用过电转均失败了。但同样的操作，本人将pKD46转到JM109（DE3）中却很容易。希望各位给帮忙分析分析为什么pKD46质粒就是转不进BL21(DE3)中。此外，本人发现BL21(DE3)基因组上位于T7RNA聚合酶基因附近有一个exo-bet-gam基因簇，因为pKD46一直转不进去，就想要是能诱导基因组上的exo-bet-gam基因簇表达也许也是能达到相同的效果，但是一直分析不出BL21(DE3)基因组上的exo-bet-gam基因簇受什么诱导。
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Neversaynever.
1楼 2013-11-25 22:57:52
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bolysu

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2013-11-26 13:34:27
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stickforver

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bolysu at 2013-11-26 13:34:27
BL21据说很难敲除了，成功了告诉我一声

确实有人说BL21(DE3）很难敲除，可是国内也有不少成功的报道，为了提高成功率我用了比较长的同源臂，可是现在问题的关键是我连质粒pKD46都转不进去.
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Neversaynever.
3楼2013-11-27 14:59:31
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