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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

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[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事已有4人参与

最近构建了两个脂肪酶重组质粒，分别转入BL21(DE3)中表达，诱导前菌体颜色一样，加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后，离心菌体，其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色（颜色略偏淡黄些），而另一个菌体就偏白色了，破碎后不是那种呈澄清状，而是有点呈乳白色，离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了，结果都是一样，这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高，跑过蛋白电泳，可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢

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人生百态原为海，看破红尘方为岸！

1楼 2011-06-29 14:21:18

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jinpeng_6118

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引用回帖:

15楼: Originally posted by bmby at 2011-12-19 10:16:11:
楼主在吗？
克隆出来的基因，怎样认定它是一个新型脂肪酶基因？
NCBI中无序列、没相关文章发表的可以肯定是新的，但是比对有80%左右的相似性可以认为是新的吗？或者说有没有具体的数值指标？

一般来说序列比对（蛋白）同源性低于90%的是被认为是新基因的，但也有其他的情况，你的酶同源性有点高或者之类的，但其它的酶学性质与现报道的具有就很大的不同或比他们都强很多，你也可以认为是个新酶，置于具体的数值指标好像是没有的吧