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jinpeng_6118木虫 (正式写手)
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BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事已有4人参与
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| 最近构建了两个脂肪酶重组质粒，分别转入BL21(DE3)中表达，诱导前菌体颜色一样，加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后，离心菌体，其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色（颜色略偏淡黄些），而另一个菌体就偏白色了，破碎后不是那种呈澄清状，而是有点呈乳白色，离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了，结果都是一样，这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高，跑过蛋白电泳，可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢 |
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jinpeng_6118
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表达的同源性在60%以下，表达就全是包涵体，换酵母以及采用分子伴侣等方法也试过，几乎可溶性都很低的，我觉得突变的话也可以，前段时间做过易错PCR，但觉得效果不太明显
12楼2011-11-05 13:48:53
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