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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒,将菌体颜色偏白是是怎么回事 已有4人参与

最近构建了两个脂肪酶重组质粒,分别转入BL21(DE3)中表达,诱导前菌体颜色一样,加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后,离心菌体,其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色(颜色略偏淡黄些),而另一个菌体就偏白色了,破碎后不是那种呈澄清状,而是有点呈乳白色,离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了,结果都是一样,这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高,跑过蛋白电泳,可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢
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bmby

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-07-21 15:28:13:
我的脂肪酶基因都是来自环境土壤宏基因组中的,现在它的酶学性质快表征完了,有一些独特的性质。

从环境土壤宏基因组中克隆的话,是先建文库筛选吗?
你是怎样设计克隆引物的?
最近也在做这个,希望能向你学习下。
7楼2011-11-04 17:49:34
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查看全部 18 个回答

gwbk

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
楼主很帅,赞赏一个
高手在潜水,慢慢等
2楼2011-06-29 16:50:15
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gwbk

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你的帖子要沉了,高手高手~~~
3楼2011-06-30 00:27:58
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original900

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问楼主构建的两个脂肪酶重组质粒,这两个质粒中的脂肪酶基因是从什么菌株中获取的,有什么特殊性质吗?我也在构建脂肪酶基因工程菌,所以有此一问!
4楼2011-07-21 15:16:02
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