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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事 已有4人参与

最近构建了两个脂肪酶重组质粒，分别转入BL21(DE3)中表达，诱导前菌体颜色一样，加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后，离心菌体，其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色（颜色略偏淡黄些），而另一个菌体就偏白色了，破碎后不是那种呈澄清状，而是有点呈乳白色，离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了，结果都是一样，这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高，跑过蛋白电泳，可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢
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1楼 2011-06-29 14:21:18
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bmby

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-04 21:49:38:
我是先建Fosmid文库，然后直接功能筛选获得阳性克隆，这样直接获得全长基因。
不知你所说的设计克隆引物是指什么？，是获得全长基因后设计全长基因两端的引物还是根据全长基因设计中间部分片段的引物？

是说设计全长基因两端的引物。
你应该是先测序，再根据序列设计引物吗？
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9楼2011-11-05 09:14:33
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gwbk

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
楼主很帅，赞赏一个
高手在潜水，慢慢等
赞一下 回复此楼
2楼2011-06-29 16:50:15
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gwbk

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的帖子要沉了，高手高手~~~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-30 00:27:58
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original900

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问楼主构建的两个脂肪酶重组质粒，这两个质粒中的脂肪酶基因是从什么菌株中获取的，有什么特殊性质吗？我也在构建脂肪酶基因工程菌，所以有此一问！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-21 15:16:02
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