24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

BioEPI: 2
应助: 28 (小学生)
金币: 5027
散金: 25
红花: 2
帖子: 856
在线: 147.9小时
虫号: 1019189
注册: 2010-05-15
性别: GG
专业: 微生物遗传学

[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事已有4人参与

最近构建了两个脂肪酶重组质粒，分别转入BL21(DE3)中表达，诱导前菌体颜色一样，加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后，离心菌体，其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色（颜色略偏淡黄些），而另一个菌体就偏白色了，破碎后不是那种呈澄清状，而是有点呈乳白色，离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了，结果都是一样，这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高，跑过蛋白电泳，可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

gwbk

» 猜你喜欢

拟解决的关键科学问题还要不要写已经有8人回复
26申博已经有3人回复
存款400万可以在学校里躺平吗已经有22人回复
最失望的一年已经有4人回复
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？已经有19人回复
请教限项目规定已经有3人回复
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？已经有10人回复
基金申报已经有6人回复
推荐一本书已经有13人回复
疑惑？已经有5人回复

人生百态原为海，看破红尘方为岸！

1楼 2011-06-29 14:21:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

BioEPI: 2
应助: 28 (小学生)
金币: 5027
散金: 25
红花: 2
帖子: 856
在线: 147.9小时
虫号: 1019189
注册: 2010-05-15
性别: GG
专业: 微生物遗传学

引用回帖:

17楼: Originally posted by bmby at 2011-12-31 12:28:52:
楼主，我的实验又出状况了

我设计的引物以宏基因组DNA为模板扩增时得不到想要的序列。。
有其他较短的序列可以扩出，而且量很大，试过退火温度梯度，但是我的目的序列一直未出现。

紧急求助！！
我已经 ...

在这里扩增你的引物设计很重要的，你的引物是不是简并引物，兼并度要低些，而且要在靠近3端简并。应该来说稍微优化下PCR条件有可能扩出来的。我们我们一般60个宏基因组样品一次做，能有三分之一以上的p出来。可能你所要的目的基因在这里面占的量极低的话也比较难扩出来的，你可以试试提取之前将土壤富集下再提，或者把你的DNA浓缩下再试试吧。