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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒,将菌体颜色偏白是是怎么回事 已有4人参与

最近构建了两个脂肪酶重组质粒,分别转入BL21(DE3)中表达,诱导前菌体颜色一样,加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后,离心菌体,其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色(颜色略偏淡黄些),而另一个菌体就偏白色了,破碎后不是那种呈澄清状,而是有点呈乳白色,离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了,结果都是一样,这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高,跑过蛋白电泳,可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢
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人生百态原为海,看破红尘方为岸!
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bmby

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 13:48:53:
你扩增基因的时候用高保真性好的酶几乎是不会突变的。我用PET21a表达的,BL21DE3,蛋白可溶性很大,还可以胞外分泌,酶活也很高的。其实与酶的本身性质关系比较大,有的很好表达,有的就很难表达,我有很多条与我 ...

所以说在设计时可以尽量选择最佳方法,但到底可溶不可溶最终还是要看具体表达情况啊。
谢谢楼主!
以后有问题了再来讨教!
13楼2011-11-07 10:14:55
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gwbk

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
楼主很帅,赞赏一个
高手在潜水,慢慢等
2楼2011-06-29 16:50:15
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gwbk

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你的帖子要沉了,高手高手~~~
3楼2011-06-30 00:27:58
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original900

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问楼主构建的两个脂肪酶重组质粒,这两个质粒中的脂肪酶基因是从什么菌株中获取的,有什么特殊性质吗?我也在构建脂肪酶基因工程菌,所以有此一问!
4楼2011-07-21 15:16:02
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