24小时热门版块排行榜    

查看: 2900  |  回复: 17
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒,将菌体颜色偏白是是怎么回事 已有4人参与

最近构建了两个脂肪酶重组质粒,分别转入BL21(DE3)中表达,诱导前菌体颜色一样,加入终浓度0.1mM IPTG 15℃诱导24h后,离心菌体,其中一个的菌体颜色为正常的大肠杆菌色(颜色略偏淡黄些),而另一个菌体就偏白色了,破碎后不是那种呈澄清状,而是有点呈乳白色,离心后沉淀比另一个多。这个质粒已经这样摇过好几次了,结果都是一样,这次是重新连接后再转了一次新买的BL21。两只里同源性很高,跑过蛋白电泳,可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。请各位高手分析下什么原因。谢谢
回复此楼
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bmby

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-11-05 13:48:53:
你扩增基因的时候用高保真性好的酶几乎是不会突变的。我用PET21a表达的,BL21DE3,蛋白可溶性很大,还可以胞外分泌,酶活也很高的。其实与酶的本身性质关系比较大,有的很好表达,有的就很难表达,我有很多条与我 ...

所以说在设计时可以尽量选择最佳方法,但到底可溶不可溶最终还是要看具体表达情况啊。
谢谢楼主!
以后有问题了再来讨教!
13楼2011-11-07 10:14:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

gwbk

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
楼主很帅,赞赏一个
高手在潜水,慢慢等
2楼2011-06-29 16:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你的帖子要沉了,高手高手~~~
3楼2011-06-30 00:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

original900

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问楼主构建的两个脂肪酶重组质粒,这两个质粒中的脂肪酶基因是从什么菌株中获取的,有什么特殊性质吗?我也在构建脂肪酶基因工程菌,所以有此一问!
4楼2011-07-21 15:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见