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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助各位虫友--去除PCR产物中的3‘端A尾
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daiguoying

木虫 (小有名气)

[求助] 求助各位虫友--去除PCR产物中的3‘端A尾

各位虫友，PCR遇到一个棘手问题，请教大家了：

我用LA tag酶 扩增质粒全长，但会得到末端带A，这是我不需要的，怎样去除末端A
用pfu可以吗？用量多少，怎样操作，查文献没找到呢，谢啦~~
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DO NOT LOSE TIME
1楼 2011-06-06 13:25:03
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daiguoying

木虫 (小有名气)
顶啊，各位高人求指点啊~~
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DO NOT LOSE TIME
2楼2011-06-07 20:16:14
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
换一个酶就行了，酶很多的
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-06-07 21:08:28
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daiguoying

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-06-07 21:08:28:
换一个酶就行了，酶很多的

你好，我因为要P一个3200bp的质粒，所以就买了LAtag酶...据说可以用pfu酶72度反应，但具体的反应时间不清楚，有哪位高人晓得~~万分感激~~啊
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DO NOT LOSE TIME
4楼2011-06-07 22:01:14
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
这么长没p过，看来还是另请高明
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5楼2011-06-07 22:28:58
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
版里不久前有人讨论过，你可以搜索下，或者翻翻前几页的帖子。
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6楼2011-06-07 23:08:35
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
daiguoying(金币+50): 谢谢，话说我买错酶了，本来要买primerstar的，买成LAtag了 2011-06-08 18:12:38
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 18:53:58
3.2kb对于一般的pfu来说太困难了，所以，TAKARA的primer Star是不二的选择，试一试吧，呵呵，好运
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7楼2011-06-08 15:30:05
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jack_0983

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 22:22:36
本帖内容被屏蔽

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daiguoying
8楼2011-06-08 16:30:29
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daiguoying

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-06-07 23:08:35:
版里不久前有人讨论过，你可以搜索下，或者翻翻前几页的帖子。

你好，谢啦~~
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DO NOT LOSE TIME
9楼2011-06-08 20:57:31
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daiguoying

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by jack_0983 at 2011-06-08 16:30:29:
pfu酶 不会产生3‘端A尾

恩，打算用两种酶都试一下，谢啦~~
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DO NOT LOSE TIME
10楼2011-06-08 20:59:05
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