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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 虚心请教各位，家蚕基因组PCR
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biotianyanan

银虫 (小有名气)

[求助] 虚心请教各位，家蚕基因组PCR

PCR体系为20微升：
DDW 14.2;10xbuffer 2；dNTP 1;F/R 0.8 ;Template 1；rTaq 0.2
PCR： 94 （94 55 72） 72  4
点样：loading 2； 样品 8  ；ladder 1.5

template 为98bp


P不出来结果，总是出来的片段大于100bp；甚至到700bp

PCR过程中严格操作，本实验室比较洁净，换了退火温度，还是达不到目标产物，请各位指导 谢谢大家
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开心每一天，科研小宇宙
1楼 2011-05-13 20:27:33
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★
biotianyanan(金币+1): 5min (均为30s) 10min forever 2011-05-14 09:08:50
lstt09nk(金币+3): 感谢交流 2011-05-14 09:25:26
你的描述意义不大

只给出各个组分的体积，不给浓度。。。。。。

只写各个环节的温度，不写时间。。。。。目的产物才98bp，你的PCR结果中居然有

700bp的，足见你的延伸时间设置极为不合理。。。。。

如果引物的特异性好的话，实验室干不干净是次要的。。。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-05-14 00:38:20
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biotianyanan

银虫 (小有名气)
PCR： 94 （94 55 72） 72            4
         5min (均为30s)   10min      forever

谢谢楼上
赞一下 回复此楼
开心每一天，科研小宇宙
3楼2011-05-14 09:08:33
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