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biotianyanan

银虫 (小有名气)

[求助] 虚心请教各位,家蚕基因组PCR

PCR体系为20微升:
DDW 14.2;10xbuffer 2;dNTP 1;F/R 0.8 ;Template 1;rTaq 0.2
PCR: 94 (94 55 72) 72  4
点样:loading 2; 样品 8  ;ladder 1.5

template 为98bp


P不出来结果,总是出来的片段大于100bp;甚至到700bp

PCR过程中严格操作,本实验室比较洁净,换了退火温度,还是达不到目标产物,请各位指导 谢谢大家
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开心每一天,科研小宇宙
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biotianyanan

银虫 (小有名气)

PCR: 94 (94 55 72) 72            4
         5min (均为30s)   10min      forever

谢谢楼上
开心每一天,科研小宇宙
3楼2011-05-14 09:08:33
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★
biotianyanan(金币+1): 5min (均为30s) 10min forever 2011-05-14 09:08:50
lstt09nk(金币+3): 感谢交流 2011-05-14 09:25:26
你的描述意义不大

只给出各个组分的体积,不给浓度。。。。。。

只写各个环节的温度,不写时间。。。。。目的产物才98bp,你的PCR结果中居然有

700bp的,足见你的延伸时间设置极为不合理。。。。。

如果引物的特异性好的话,实验室干不干净是次要的。。。。。。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-05-14 00:38:20
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