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关于双酶切位点的选择及其条件
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wolaiyefeng
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]
关于双酶切位点的选择及其条件
求助:请问有谁知道双酶切位点选择时应该考虑哪些方面的因素啊?另外如果选择的某一酶切位点事甲基化了的话,对酶连 有什么影响???
[
Last edited by wolaiyefeng on 2011-4-25 at 22:39
]
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1楼
2011-04-25 22:28:52
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cxl_yll
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专业: 抗肿瘤药物药理
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-04-27 16:55:03
1.要看是否只有单一酶切位点
2看是否有共同的缓冲溶液
3看单个酶在共同缓冲溶液的活性
4如果有甲基化的话,先转化到甲基化缺陷菌,再提质粒继续做...
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4楼
2011-04-26 22:10:59
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sunbio
禁言
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wolaiyefeng(金币+1): 非常感谢!!! 2011-04-26 15:53:43
西瓜:编辑内容 2011-04-26 17:18
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2楼
2011-04-26 10:55:35
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susizheng
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-26 19:04:44
首先你所选的两个酶切在你的基因中不要存在。
其次如果用那些酶切buffer还有N多种的那些酶的话,得考虑buffer的兼容性。(其实现在很多酶都用通用的buffer了。)
如果选择的某一酶切位点甲基化,可能会导致酶切不动,你就找甲基化缺陷型菌株转质粒,提质粒,再切吧。(会出现这问题吗?没遇到过啊。)
PS:楼上打广告,等咔嚓咔嚓吧。
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Thank-you,so-blue.
3楼
2011-04-26 17:07:44
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