| 查看: 1640 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lliuzhi金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】PCR求助 已有9人参与
|
||
| 本人做的是普通PCR，刚开始做一直有目的产物，用的是生工的Taq酶，但是总会出现阶段性没有产物的情况，甚至都没有非特异性产物和引物二聚体。之前怀疑是酶出了问题或者是模板降解了，但是经检测后模板没有问题，也换了Taq、 TAKARA的Extaq、rtaq、生工的Pfu、可是仍旧没有产物，后来偶然用同样的东西又能P出来了，但是很不稳定，过几天又没有了，请问高手是什么问题呢 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有133人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量PCR。。。求助求助
已经有17人回复
- 求助实时荧光PCR
已经有8人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- SSR-PCR求助
已经有21人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr求助
已经有11人回复
- 【求助/交流】PCR问题求助
已经有27人回复
- 【求助/交流】PCR得到几条带，怎么办
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR求助，做不出来找不到原因
已经有16人回复
- 【求助/交流】菌落PCR求助
已经有23人回复
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR 总是没P出来
已经有21人回复
bioartist
木虫 (正式写手)
无菌草莓
- MolEPI: 3
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2012.9
- 红花: 4
- 帖子: 611
- 在线: 105.2小时
- 虫号: 419482
- 注册: 2007-07-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
我认为这问题的原因很多！ 1. 程序问题，请确定PCR仪器和设定的程序； I. 变性温度足够，对于基因组95度5min可以了，以菌液为模板的话，阴性菌可以延长5min，而阳性菌则可以延长到15min，不比担心聚合酶变性； II. 退火温度，第一次做的话，可以设定一个梯度，退火50-65度的温度梯度，这个范围30S时间对于引物都可以与模板结合； III. 延伸温度，taq酶-1.0K/min，pfu酶-0.5K/min；各个公司的常规聚合酶的差别主要在保证性和延伸速度上，大多数都差别不大，没别要频繁更换聚合酶； 2. 引物问题 请再次分析下你的序列，是否和你要扩增的基因匹配，并且预测下它们的Tm值，请不要低于55度，我个人常用的Tm值一般在58-62度之间； 3. 对于上面提到的加样问题，在实验操作时，也要注意小心加样，聚合酶太多的话，对反应是有抑制作用的，根据每种聚合酶自己的说明书参考设计反应体系即可。 以上是个人的一些经验，楼主如果有什么问题，可以随时和我联系。祝你成功。 |
9楼2011-03-19 17:05:49
scelab
荣誉版主 (文坛精英)
小木虫之有关部门负责人
- 应助: 63 (初中生)
- 贵宾: 1.475
- 金币: 8294.6
- 散金: 4158
- 红花: 39
- 沙发: 99
- 帖子: 21277
- 在线: 3169.3小时
- 虫号: 482065
- 注册: 2007-12-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
2楼2011-03-17 09:12:44
3楼2011-03-17 10:26:09
飘在海上的雪
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2775.3
- 散金: 1014
- 红花: 5
- 帖子: 586
- 在线: 191.1小时
- 虫号: 223239
- 注册: 2006-03-21
- 专业: 生物物理化学
4楼2011-03-17 10:40:58
