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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR求助
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lliuzhi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR求助 已有9人参与

本人做的是普通PCR，刚开始做一直有目的产物，用的是生工的Taq酶，但是总会出现阶段性没有产物的情况，甚至都没有非特异性产物和引物二聚体。之前怀疑是酶出了问题或者是模板降解了，但是经检测后模板没有问题，也换了Taq、 TAKARA的Extaq、rtaq、生工的Pfu、可是仍旧没有产物，后来偶然用同样的东西又能P出来了，但是很不稳定，过几天又没有了，请问高手是什么问题呢
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1楼 2011-03-17 08:53:50
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
谢谢大家
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7楼2011-03-18 15:57:45
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
谢谢大家的帮助。
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10楼2011-03-20 08:19:57
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-03-19 16:41:42:
假如引物没问题的话，优化PCR体系，加大模板量以及循环数~试试看！

我现在已经加大了模板量，循环次数是34次，但是还是会出现我所述的情况，还是会时而有产物，时而没有，至于PCR体系，我之前有优化过，在优化后的一段时间内还是很稳定的会P出产物，我的退火温度倒不是很高，只有52度不知道是不是还需要优化？谢谢！
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11楼2011-03-20 10:26:06
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lliuzhi at 2011-03-17 08:53:50:
本人做的是普通PCR，刚开始做一直有目的产物，用的是生工的Taq酶，但是总会出现阶段性没有产物的情况，甚至都没有非特异性产物和引物二聚体。之前怀疑是酶出了问题或者是模板降解了，但是经检测后模板没有问题，也 ...

模板有限呀
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12楼2011-03-20 10:30:32
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