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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR求助
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lliuzhi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR求助 已有9人参与

本人做的是普通PCR，刚开始做一直有目的产物，用的是生工的Taq酶，但是总会出现阶段性没有产物的情况，甚至都没有非特异性产物和引物二聚体。之前怀疑是酶出了问题或者是模板降解了，但是经检测后模板没有问题，也换了Taq、 TAKARA的Extaq、rtaq、生工的Pfu、可是仍旧没有产物，后来偶然用同样的东西又能P出来了，但是很不稳定，过几天又没有了，请问高手是什么问题呢
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1楼 2011-03-17 08:53:50
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-03-19 16:41:42:
假如引物没问题的话，优化PCR体系，加大模板量以及循环数~试试看！

我现在已经加大了模板量，循环次数是34次，但是还是会出现我所述的情况，还是会时而有产物，时而没有，至于PCR体系，我之前有优化过，在优化后的一段时间内还是很稳定的会P出产物，我的退火温度倒不是很高，只有52度不知道是不是还需要优化？谢谢！
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11楼2011-03-20 10:26:06
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
每次做3个平行，减少偶然因素
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小木虫之有关部门负责人
2楼2011-03-17 09:12:44
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xwsooo

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2): 有道理 2011-03-17 10:52:22
检查实验记录，何时做出来，何时又没有；还有，加样时要准确，特别在微量情况下，误差容易变大。这是我的一点体会。还有，可能就是体系还不完善，才会出现如此貌似怪异的事件。
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3楼2011-03-17 10:26:09
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一次做不出来的时候，二次PCR，我有的甚至做过三次PCR,能出结果
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不在沉默中爆发，就在沉默着死亡！
4楼2011-03-17 10:40:58
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