| 查看: 3534 | 回复: 17 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
|
||||
| 我的蛋白当没有组氨酸标记时的活性很好，而加上组氨酸标记后，活性稍减弱，纯化后的条带很粗且单一，但检测不到活性，我尝试了降低诱导温度，IPTG的量，效果都不理想，能不能帮我分析分析，该怎么优化呢 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有10人回复
-
基金系统什么内容也没有
已经有7人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有12人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
面上合作单位盖章
已经有5人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有7人回复
-
申请删除本帖
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问表达载体pPIC9K里有几个XhoI的酶切位点？
已经有8人回复
- 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到酶蛋白上？
已经有20人回复
- 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
已经有17人回复
- 包涵体复性试剂盒
已经有7人回复
- 包涵体有活性吗？
已经有10人回复
- 蛋白形成多聚体
已经有6人回复
- 请教组氨酸标记切除问题
已经有12人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到我的蛋白上去？
已经有13人回复
- 关于组氨酸标签 洗脱 问题
已经有14人回复
- 酶纯化后没有活性
已经有13人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- 如何解决包涵体复性沉淀问题？
已经有16人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 有没有一种 tag，连到蛋白上蛋白就失活了呢？
已经有7人回复
- 如果蛋白序列N或者C末端多了6个组氨酸，怎么分析蛋白结构呢？
已经有4人回复
- 同时表达两种蛋白表达问题
已经有3人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- 组氨酸标记蛋白的纯化
已经有6人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- PET32a的组氨酸标签和我的蛋白加起来应该多大呀？
已经有5人回复
- IPTG怎么检测？
已经有4人回复
- 【求助】包涵体表达与可溶性表达
已经有6人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？
已经有10人回复
请问最后是怎么解决的呀，超声对蛋白活性真的有影响吗 
18楼2015-11-24 15:48:12
2楼2011-01-13 21:49:09
3楼2011-01-13 21:57:05
★ ★
rainwander(金币+2):解释的很到位，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 23:43:29
rainwander(金币+2):解释的很到位，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 23:43:29
|
没有活性可能存在两种原因： 1 his tag影响了活性，尝试切除his tag后再次测定酶活。如果目前载体上没有酶切位点可以更换至有酶切位点的载体（例如pET28a N段his tag可以使用thrombin切除his tag）。或者重新构建表达载体，自己引入酶切位点。 2 如果切除了标签还是没有活性那就是蛋白本身的问题了。有些真核蛋白即使上清表达也是没有正确折叠的，或者没有进行表达后修饰，没有生物活性。这种情况就比较杯具了。 [ Last edited by 月月大可 on 2011-1-13 at 22:11 ] |
4楼2011-01-13 22:08:33
30
投票:
