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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR电泳结果疑问

试验中用pmd-19载体连接2kb的目的片段,转入感受态大肠杆菌,菌液长起后涂带有氨苄抗性的LB板,有菌落长出,挑取菌落接于带氨苄抗性的液体LB培养基中,待菌长起后取菌液直接做PCR扩增目的条带,但电泳图却显示无目的条带,有的只是200bp的非目的条带,不知原因何在,难道在抗性板上长出的都是假阳性菌,请高人指点!
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shaquila

金虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-13 15:10:12
lz,如果你的insert浓度太低,可以试试降低plasmid浓度~~
我用takara 18t,10ul体系推荐用量为1ul,我一般加0.3到0.5,连接时间半小时,假阳性明显降低,这个试剂盒有一定几率的自连,而且和载体浓度有关,之前用1ul时候,挑了30个克隆才3个,后来用0.3,100%都是插入的~
9楼2011-01-13 11:18:49
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duanming123

木虫 (正式写手)



最爱花诗雨(金币+1):鼓励交流 2011-01-08 15:56:20
有可能没连上,筛菌PCR做的没问题吧。不行再做一次吧。
2楼2011-01-08 15:55:09
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)



dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-10 09:08:51
PCR验证也不一定就是很准的,建议提质粒或再进一步酶切验证一下看!
3楼2011-01-08 17:49:22
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)



silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 11:52:24
是氨苄抗性吗,再者氨苄的浓度,及其实效,是否失效
5楼2011-01-10 09:23:13
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