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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR电泳结果疑问
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR电泳结果疑问

试验中用pmd-19载体连接2kb的目的片段，转入感受态大肠杆菌，菌液长起后涂带有氨苄抗性的LB板，有菌落长出，挑取菌落接于带氨苄抗性的液体LB培养基中，待菌长起后取菌液直接做PCR扩增目的条带，但电泳图却显示无目的条带，有的只是200bp的非目的条带，不知原因何在，难道在抗性板上长出的都是假阳性菌，请高人指点！
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1楼 2011-01-08 15:29:32
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2011-01-13 15:10:12
lz，如果你的insert浓度太低，可以试试降低plasmid浓度～～
我用takara 18t，10ul体系推荐用量为1ul，我一般加0.3到0.5，连接时间半小时，假阳性明显降低，这个试剂盒有一定几率的自连，而且和载体浓度有关，之前用1ul时候，挑了30个克隆才3个，后来用0.3，100％都是插入的～
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9楼2011-01-13 11:18:49
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duanming123

木虫 (正式写手)
★
最爱花诗雨(金币+1):鼓励交流 2011-01-08 15:56:20
有可能没连上，筛菌PCR做的没问题吧。不行再做一次吧。
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2楼2011-01-08 15:55:09
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-10 09:08:51
PCR验证也不一定就是很准的，建议提质粒或再进一步酶切验证一下看！
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3楼2011-01-08 17:49:22
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 11:52:24
是氨苄抗性吗，再者氨苄的浓度，及其实效，是否失效
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5楼2011-01-10 09:23:13
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