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【求助/交流】PCR电泳结果疑问
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暗夜懒猫
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虫号: 821908
[交流]
【求助/交流】PCR电泳结果疑问
试验中用pmd-19载体连接2kb的目的片段,转入感受态大肠杆菌,菌液长起后涂带有氨苄抗性的LB板,有菌落长出,挑取菌落接于带氨苄抗性的液体LB培养基中,待菌长起后取菌液直接做PCR扩增目的条带,但电泳图却显示无目的条带,有的只是200bp的非目的条带,不知原因何在,难道在抗性板上长出的都是假阳性菌,请高人指点!
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2011-01-08 15:29:32
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shaquila
金虫
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暗夜懒猫(金币+2): 2011-01-13 14:53:27
引用回帖:
Originally posted by
暗夜懒猫
at 2011-01-13 14:26:21:
我用的浓度不很大啊,0.5,就是连接时间有点长,有十个小时左右了。不是一般都说连接过夜嘛。
T载体按说明书说半小时足够了,而且在室温或冰箱里也能连接哦,所以,效率太高也不好~~~
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12楼
2011-01-13 14:38:00
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duanming123
木虫
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★
最爱花诗雨(金币+1):鼓励交流 2011-01-08 15:56:20
有可能没连上,筛菌PCR做的没问题吧。不行再做一次吧。
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2楼
2011-01-08 15:55:09
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srlee
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★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-10 09:08:51
PCR验证也不一定就是很准的,建议提质粒或再进一步酶切验证一下看!
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3楼
2011-01-08 17:49:22
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xuqingchun33
银虫
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★
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 11:52:24
是氨苄抗性吗,再者氨苄的浓度,及其实效,是否失效
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5楼
2011-01-10 09:23:13
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