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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR电泳结果疑问
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR电泳结果疑问

试验中用pmd-19载体连接2kb的目的片段，转入感受态大肠杆菌，菌液长起后涂带有氨苄抗性的LB板，有菌落长出，挑取菌落接于带氨苄抗性的液体LB培养基中，待菌长起后取菌液直接做PCR扩增目的条带，但电泳图却显示无目的条带，有的只是200bp的非目的条带，不知原因何在，难道在抗性板上长出的都是假阳性菌，请高人指点！
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1楼 2011-01-08 15:29:32
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-13 11:12:42:


就是挑取少量菌体至pcr事先加入10or20ul去离子水的小管中，然后pcr仪中裂解~裂解出来的就可以当模板用了！

倒是没有这样挑过，可以避免假阳性吗? 如果你板上的菌为假阳性直接跳到PCR体系中电泳不也是不出条带吗？
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10楼2011-01-13 14:22:50
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duanming123

木虫 (正式写手)
★
最爱花诗雨(金币+1):鼓励交流 2011-01-08 15:56:20
有可能没连上，筛菌PCR做的没问题吧。不行再做一次吧。
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2楼2011-01-08 15:55:09
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-10 09:08:51
PCR验证也不一定就是很准的，建议提质粒或再进一步酶切验证一下看！
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3楼2011-01-08 17:49:22
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 11:52:24
是氨苄抗性吗，再者氨苄的浓度，及其实效，是否失效
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5楼2011-01-10 09:23:13
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