24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4422  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转化

请教各位大虾,本人现在在做毕赤酵母的电转化,想问一下:
(1)大家线性化的质粒都加多少啊?我一般都加20微,回收后跑胶也挺亮的,量挺大的,我们的电转杯是400微的,当时买的时候没有注意,现在酵母加进去就有200多微吧,这样子。
(2)电转化后大家是静止培养还是慢摇培养啊?问的别人也是说什么的都有……
(3)最最郁闷的就是后培养后的涂布,我们这边用的都是6cm的小平板,G418浓度时1mg/mL,第一次的时候就是离心全部涂布,然后板上面全部长满,当然有一个师兄说这个是“尸体”以前实验室也没有人做酵母,没有所谓的经验。后来又买了新的G418,做了抗性检验,涂布空的GS115也是长满,这个汗啊,但是没有单菌落,问了别人,也有人说是有菌的,但是转化子是能长出来单菌落的……
码了好多字,大家帮忙看看吧先谢过了!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)


什么载体,什么菌啊

PPIC9K好像要用营养缺陷和抗性双筛选才能出单菌落的
6楼2010-12-07 16:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)


dhmdddd(金币+1):因为我是要高表达的菌株,所以用了G418,你的MM培养基是什么啊?没有用过…… 2010-12-07 11:51:23
线性化的质粒20ul应该算是够了,要求是在5-10ug,只要是是跑胶很亮应该是不成问题,话说回来,质粒量不够,几率还是有的
电转后要慢慢摇,英语说的gentel shake,至于到底多少转,只能自己摸索了
至于G148这个问题,我没有用过,我是用的Bgl线性化的,用MD和MM筛选,最后做PCR克隆来鉴定阳性克隆的
2楼2010-12-07 11:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

旋木晴晴

金虫 (小有名气)


dhmdddd(金币+1):不要离心的是吧? 2010-12-07 13:02:33
电转后静置放置。电转一次可以涂几块板
3楼2010-12-07 12:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 旋木晴晴 at 2010-12-07 12:46:16:
电转后静置放置。电转一次可以涂几块板

恩,又一次也是涂布量也比较少,结果后来还是长满了,就是平铺,也没有见单菌落……
4楼2010-12-07 13:26:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +3 楒桉 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:12 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +7 麻辣鱿鱼 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:17 by zllcz
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 303求调剂 +7 安忆灵 2026-03-22 8/400 2026-03-27 11:46 by sanrepian
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
信息提示
请填处理意见