24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4425  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】关于毕赤酵母电转化

请教各位大虾,本人现在在做毕赤酵母的电转化,想问一下:
(1)大家线性化的质粒都加多少啊?我一般都加20微,回收后跑胶也挺亮的,量挺大的,我们的电转杯是400微的,当时买的时候没有注意,现在酵母加进去就有200多微吧,这样子。
(2)电转化后大家是静止培养还是慢摇培养啊?问的别人也是说什么的都有……
(3)最最郁闷的就是后培养后的涂布,我们这边用的都是6cm的小平板,G418浓度时1mg/mL,第一次的时候就是离心全部涂布,然后板上面全部长满,当然有一个师兄说这个是“尸体”以前实验室也没有人做酵母,没有所谓的经验。后来又买了新的G418,做了抗性检验,涂布空的GS115也是长满,这个汗啊,但是没有单菌落,问了别人,也有人说是有菌的,但是转化子是能长出来单菌落的……
码了好多字,大家帮忙看看吧先谢过了!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-12-07 23:35:04:
加点Zeosin

那会不会有毕赤酵母GS115不是组氨酸缺陷型的啊?
11楼2010-12-08 08:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)


dhmdddd(金币+1):因为我是要高表达的菌株,所以用了G418,你的MM培养基是什么啊?没有用过…… 2010-12-07 11:51:23
线性化的质粒20ul应该算是够了,要求是在5-10ug,只要是是跑胶很亮应该是不成问题,话说回来,质粒量不够,几率还是有的
电转后要慢慢摇,英语说的gentel shake,至于到底多少转,只能自己摸索了
至于G148这个问题,我没有用过,我是用的Bgl线性化的,用MD和MM筛选,最后做PCR克隆来鉴定阳性克隆的
2楼2010-12-07 11:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

旋木晴晴

金虫 (小有名气)


dhmdddd(金币+1):不要离心的是吧? 2010-12-07 13:02:33
电转后静置放置。电转一次可以涂几块板
3楼2010-12-07 12:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 旋木晴晴 at 2010-12-07 12:46:16:
电转后静置放置。电转一次可以涂几块板

恩,又一次也是涂布量也比较少,结果后来还是长满了,就是平铺,也没有见单菌落……
4楼2010-12-07 13:26:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +6 楒桉 2026-03-28 6/300 2026-03-29 00:31 by 544594351
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 0856,材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 085404求调剂,总分309,本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 材料学硕,求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
信息提示
请填处理意见