应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
391/1返回列表
查看: 7163  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shyuyafeng

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题

我跑的样品是蛋白，最近跑电泳的时候，样品刚进入分离胶的时候成线状，但是过了一会就开始弥散，昨天今天都是这样，昨天浓缩胶是80v，分离胶是100v，昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题，今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题，电泳液也是新配的，
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-13 15:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
rainwander:找到原因就好。我做的时候都是混合加热8-15分钟，跑之前离心1min，跑完之后染色，没问题。 2010-12-12 16:33:12
引用回帖:
Originally posted by piaopiao233 at 2010-11-16 17:16:19:
已经发现问题了，是什么原因呢？让大家都借鉴一下啊

恩，我觉得主要的问题是，我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短，平时都是3min中，这次我延长到了8分钟，这样使蛋白质和SDS充分结合，然后在上样之前我又离心了一遍，2min，最后跑的条带就很好，基本上没有弥散和拖尾了。
赞一下(2人) 回复此楼
19楼2010-11-16 21:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chemifunan

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-17 11:11:57
哦 对的 上样前是要离心 忘了说了

上次是说 装溴酚兰母液的瓶子也会沉淀 就是在往蛋白里加之前 煮之前的时候 装溴酚兰变性液 也离一下 取上层的加到蛋白样品里 5* stock就是1:4 不要太多 然后沸水浴8分钟 (过长会断掉一些蛋白 10min内不会 但是楼主你3min是短了 前沿弥散可能和溴酚兰过量有关系) 再离心 12000rpm 1min 取上清PAGE 就可以了
赞一下(3人) 回复此楼
25楼2010-11-17 09:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

375433261

新虫 (小有名气)
★ ★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 16:03:39
应该不是电压的问题，我就是用这样的电压跑的 ，跑出的条带挺好的，应该是你的样品浓度太高了，或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-13 15:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hwamg

银虫 (正式写手)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
弥撒是不是你的交联剂temed有问题或配比当啊 电压我们浓缩80v  分离胶120v
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-11-13 16:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
★ ★
scelab:编辑内容 2010-11-13 18:49
scelab:我帮你传了上来~~~ 2010-11-13 18:50:16
silicare(金币+2):鼓励上图 2010-11-15 17:22:10
内容已删除
回复此楼
4楼2010-11-13 17:40:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 375433261 at 2010-11-13 15:59:37:
应该不是电压的问题，我就是用这样的电压跑的 ，跑出的条带挺好的，应该是你的样品浓度太高了，或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的

15%的分离胶 配方是按分子生物手册上配的肯定没问题，样品浓度高会导致弥散吗？
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-13 17:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hwamg at 2010-11-13 16:36:06:
弥撒是不是你的交联剂temed有问题或配比当啊 电压我们浓缩80v  分离胶120v

TE是买的现成的，应该没有问题，配比是按分子生物手册上配的，没有问题啊。
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-13 17:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一夜不留痕

银虫 (初入文坛)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
兄弟 你跑的是不是tricine胶 也就是三层胶呀  如果是的话 可能是负极电泳液弄错了  PH出问题了或者是没有加SDS
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-11-15 12:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhuijuan

金虫 (小有名气)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by shyuyafeng at 2010-11-13 17:51:23:


15%的分离胶 配方是按分子生物手册上配的肯定没问题，样品浓度高会导致弥散吗？

只知道样品盐浓度高会导致电泳条带弥散。不清楚浓度的影响。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-11-15 12:56:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyf10071121

新虫 (初入文坛)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
我试验的时候也出现了这样的情况，不过还好了最后不影响后续的试验啊！
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-15 13:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaopiao233

金虫 (小有名气)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
是多大的蛋白质啊，要用到这个浓度的胶吗？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-11-15 14:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by piaopiao233 at 2010-11-15 14:01:36:
是多大的蛋白质啊，要用到这个浓度的胶吗？

分子量大概在20kd-30kd。
赞一下 回复此楼
11楼2010-11-15 17:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 一夜不留痕 at 2010-11-15 12:49:36:
兄弟 你跑的是不是tricine胶 也就是三层胶呀  如果是的话 可能是负极电泳液弄错了  PH出问题了或者是没有加SDS

不是啊，我的两层胶，分离胶和浓缩胶~
赞一下 回复此楼
12楼2010-11-15 17:14:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wyf10071121 at 2010-11-15 13:28:09:
我试验的时候也出现了这样的情况，不过还好了最后不影响后续的试验啊！

那你染色后小分子量的条带能看清楚吗？
赞一下 回复此楼
13楼2010-11-15 17:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaopiao233

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-15 23:08:44
shyuyafeng(金币+3):谢谢，我已经发现问题了。 2010-11-16 16:52:29
你看的时候不光要看电压
一般我们是保持电流的恒定，所以有时候电压会上下浮动一点，要不然会跑的很慢之类的。
还有你的样品是怎么制得的？上样缓冲液有没有什么问题？你的蛋白marker在电泳过程中也出现弥散吗？
建议你先看看样品，确定没什么问题再看胶。
以前这个仪器别人用的时候有没有什么问题？换个浓度试试？换别人的样试一试？
多试几次肯定就明白了
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2010-11-15 19:15:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xqlcjy

银虫 (小有名气)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
同意楼上的，还是先看看你的MARKER，如果你的MARKER没有问题，说明你加样就有问题了
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2010-11-15 21:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luohuijun

木虫 (小有名气)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
看样子应该是样品量加多了，你减少量，调一下分离胶与浓缩胶的比例。
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2010-11-16 16:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaopiao233

金虫 (小有名气)
已经发现问题了，是什么原因呢？让大家都借鉴一下啊
赞一下 回复此楼
17楼2010-11-16 17:16:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chemifunan

木虫 (正式写手)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
shyuyafeng(金币+4): 2010-11-16 21:09:16
楼主同学 这个正常 不算弥散 样品是否弥散要染色后看你的目标条带的情况才知道 跑的时候看到的是溴酚兰 溴酚兰跑花了不代表条带跑花 在电泳中 确实也有溴酚兰从头到尾是一条细线的时候 （虽然这也不代表你的样品不弥散 这两件事不是没有关系 而是没有必然的关系） 毕竟这样好看一点 我没仔细分析过这个原因和技巧 只要染色过后我要的band清楚就行了

如果各种溶液没问题的话 那我觉得和配的溴酚兰有关 溴酚兰不要上太多 母液用之前离心一下 去掉里面的沉淀物 如果还不行 看看换个电泳槽 不同的电泳槽状态不一样 冒泡的速度都不一样

但是不影响你看结果 我觉得不用搞这么紧张
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2010-11-16 19:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2010-11-16 19:51:22:
楼主同学 这个正常 不算弥散 样品是否弥散要染色后看你的目标条带的情况才知道 跑的时候看到的是溴酚兰 溴酚兰跑花了不代表条带跑花 在电泳中 确实也有溴酚兰从头到尾是一条细线的时候 （虽然这也不代表你的样品不 ...

恩，我今天跑的样就很好，可能就如你说的上样前离心一下效果不错。
赞一下 回复此楼
20楼2010-11-16 21:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qutao1720

金虫 (小有名气)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
可能是样品里的盐浓度高啦
赞一下(1人) 回复此楼
21楼2010-11-16 21:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
你的样品是什么呀？蛋白是溶解在什么里的？
赞一下(1人) 回复此楼
22楼2010-11-16 22:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjyxhyxqh

木虫 (正式写手)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
从照片来看，你跑得没有问题。下面的那种拖尾，有时是正常的。你染色后就知道了。
赞一下(1人) 回复此楼
23楼2010-11-16 22:34:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiong86yu

金虫 (正式写手)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
估计还是浓度问题，
赞一下(1人) 回复此楼
24楼2010-11-16 22:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaopiao233

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shyuyafeng at 2010-11-16 21:11:20:

恩，我今天跑的样就很好，可能就如你说的上样前离心一下效果不错。

哦这样啊，我们一般煮5min。而且注意一下，要在水开了放进去，要不然时间是不对的，可能煮了半天还是不开的水，不到100℃
赞一下(1人) 回复此楼
26楼2010-11-17 11:12:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2009227004

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shyuyafeng at 2010-11-16 21:09:03:

恩，我觉得主要的问题是，我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短，平时都是3min中，这次我延长到了8分钟，这样使蛋白质和SDS充分结合，然后在上样之前我又离心了一遍，2min，最后跑的条带就很好， ...

我们一般加热都是95度10分钟。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
27楼2010-11-17 14:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2009227004

金虫 (正式写手)
其实散一点也还好，只要跑出来的蛋白 没有什么问题就OK了
赞一下 回复此楼
28楼2010-11-17 14:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muziyu1024

金虫 (小有名气)
样品pH的问题
回复此楼
29楼2010-12-02 00:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我遇见过一次，后来发现是电流过大的原因
赞一下(1人) 回复此楼
30楼2010-12-02 08:44:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是胶浓度没有调整好，或者是TEMED问题，交联的不够好，现在气温低，可能有影响，你可以灌好上层胶后放在37℃ 的培养箱里让之凝固，快而且好
赞一下(1人) 回复此楼
31楼2010-12-02 08:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jessica533

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):反了电流不通 就下不去了 2010-12-02 12:08:42
你的塑料对称板似乎放反了哎
赞一下(2人) 回复此楼
32楼2010-12-02 10:30:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jessica533

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我是说不加样品的对称板放反了，反了也没什么了，并不妨碍电路，只是也许会漏缓冲液，多加点缓冲液就ok了
赞一下(1人) 回复此楼
33楼2010-12-03 09:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jessica533 at 2010-12-03 09:13:03:
我是说不加样品的对称板放反了，反了也没什么了，并不妨碍电路，只是也许会漏缓冲液，多加点缓冲液就ok了

没有放反哦，它本来就是这样的，上面也写了这面朝里。
赞一下 回复此楼
34楼2010-12-03 13:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

茜茜1986

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我怀疑和分离胶缓冲液有关 你看一下你的缓冲液的pH值是否正确，我以前有过类似的经历，发现是缓冲液的pH值的问题，重新配了就好了
赞一下(1人) 回复此楼
35楼2010-12-03 16:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aersileng

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
注意下你的loading buffer，有段时间我的SDS下端不能成线，后面换了loading buffer，解决了
赞一下(1人) 回复此楼
36楼2010-12-12 15:02:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuaisuo1984

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没问题呢，我的也是弥散的，但是那只是溴酚蓝的弥散，出来的条带还是挺好的，主要是控制好样品浓度。
赞一下(1人) 回复此楼
37楼2010-12-14 11:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tea_gl9871

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by shyuyafeng at 2010-11-16 21:09:03:
恩，我觉得主要的问题是，我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短，平时都是3min中，这次我延长到了8分钟，这样使蛋白质和SDS充分结合，然后在上样之前我又离心了一遍，2min，最后跑的条带就很好， ...

能不能解释一下为什么要把样品和buffer混合后加热100度8分钟？
还有你的样品最终定量到多大浓度？每孔上样多少？能否把你现在的protocol给我发一份，我也在做SDS-PAGE。希望得到你的指点，谢谢！！
我的邮箱tea_gl@126.com
赞一下(1人) 回复此楼
38楼2011-12-12 08:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

还好吧DJ

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我今天也遇到了这个情况，将蛋白稀释了一下，就好了。看了前辈们的东西，收获很大！！
赞一下 回复此楼
39楼2014-10-05 14:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shyuyafeng 的主题更新
391/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭