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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题

我跑的样品是蛋白，最近跑电泳的时候，样品刚进入分离胶的时候成线状，但是过了一会就开始弥散，昨天今天都是这样，昨天浓缩胶是80v，分离胶是100v，昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题，今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题，电泳液也是新配的，
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1楼 2010-11-13 15:53:10
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
rainwander:找到原因就好。我做的时候都是混合加热8-15分钟，跑之前离心1min，跑完之后染色，没问题。 2010-12-12 16:33:12
引用回帖:
Originally posted by piaopiao233 at 2010-11-16 17:16:19:
已经发现问题了，是什么原因呢？让大家都借鉴一下啊

恩，我觉得主要的问题是，我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短，平时都是3min中，这次我延长到了8分钟，这样使蛋白质和SDS充分结合，然后在上样之前我又离心了一遍，2min，最后跑的条带就很好，基本上没有弥散和拖尾了。
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19楼2010-11-16 21:09:03
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375433261

新虫 (小有名气)
★ ★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 16:03:39
应该不是电压的问题，我就是用这样的电压跑的 ，跑出的条带挺好的，应该是你的样品浓度太高了，或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的
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2楼2010-11-13 15:59:37
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hwamg

银虫 (正式写手)
★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
弥撒是不是你的交联剂temed有问题或配比当啊 电压我们浓缩80v  分离胶120v
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3楼2010-11-13 16:36:06
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 375433261 at 2010-11-13 15:59:37:
应该不是电压的问题，我就是用这样的电压跑的 ，跑出的条带挺好的，应该是你的样品浓度太高了，或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的

15%的分离胶 配方是按分子生物手册上配的肯定没问题，样品浓度高会导致弥散吗？
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5楼2010-11-13 17:51:23
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