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[交流]
【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
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我跑的样品是蛋白，最近跑电泳的时候，样品刚进入分离胶的时候成线状，但是过了一会就开始弥散，昨天今天都是这样，昨天浓缩胶是80v，分离胶是100v，昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题，今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题，电泳液也是新配的， |
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scelab:编辑内容 2010-11-13 18:49
scelab:我帮你传了上来~~~ 2010-11-13 18:50:16
silicare(金币+2):鼓励上图 2010-11-15 17:22:10
scelab:编辑内容 2010-11-13 18:49
scelab:我帮你传了上来~~~ 2010-11-13 18:50:16
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scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-15 23:08:44
shyuyafeng(金币+3):谢谢，我已经发现问题了。 2010-11-16 16:52:29
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-15 23:08:44
shyuyafeng(金币+3):谢谢，我已经发现问题了。 2010-11-16 16:52:29
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你看的时候不光要看电压 一般我们是保持电流的恒定，所以有时候电压会上下浮动一点，要不然会跑的很慢之类的。 还有你的样品是怎么制得的？上样缓冲液有没有什么问题？你的蛋白marker在电泳过程中也出现弥散吗？ 建议你先看看样品，确定没什么问题再看胶。 以前这个仪器别人用的时候有没有什么问题？换个浓度试试？换别人的样试一试？ 多试几次肯定就明白了 |
14楼2010-11-15 19:15:51
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shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
shyuyafeng(金币+4): 2010-11-16 21:09:16
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
shyuyafeng(金币+4): 2010-11-16 21:09:16
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楼主同学 这个正常 不算弥散 样品是否弥散要染色后看你的目标条带的情况才知道 跑的时候看到的是溴酚兰 溴酚兰跑花了不代表条带跑花 在电泳中 确实也有溴酚兰从头到尾是一条细线的时候 （虽然这也不代表你的样品不弥散 这两件事不是没有关系 而是没有必然的关系） 毕竟这样好看一点 我没仔细分析过这个原因和技巧 只要染色过后我要的band清楚就行了 如果各种溶液没问题的话 那我觉得和配的溴酚兰有关 溴酚兰不要上太多 母液用之前离心一下 去掉里面的沉淀物 如果还不行 看看换个电泳槽 不同的电泳槽状态不一样 冒泡的速度都不一样 但是不影响你看结果 我觉得不用搞这么紧张 |
18楼2010-11-16 19:51:22
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我是说不加样品的对称板放反了，反了也没什么了，并不妨碍电路，只是也许会漏缓冲液，多加点缓冲液就ok了 33楼2010-12-03 09:13:03
34楼2010-12-03 13:06:45
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36楼2010-12-12 15:02:28
37楼2010-12-14 11:08:08
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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能不能解释一下为什么要把样品和buffer混合后加热100度8分钟？ 还有你的样品最终定量到多大浓度？每孔上样多少？能否把你现在的protocol给我发一份，我也在做SDS-PAGE。希望得到你的指点，谢谢！！ 我的邮箱tea_gl@126.com |
38楼2011-12-12 08:58:04
39楼2014-10-05 14:32:07
