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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题

我跑的样品是蛋白，最近跑电泳的时候，样品刚进入分离胶的时候成线状，但是过了一会就开始弥散，昨天今天都是这样，昨天浓缩胶是80v，分离胶是100v，昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题，今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题，电泳液也是新配的，
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1楼2010-11-13 15:53:10
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
★ ★
scelab:编辑内容 2010-11-13 18:49
scelab:我帮你传了上来~~~ 2010-11-13 18:50:16
silicare(金币+2):鼓励上图 2010-11-15 17:22:10
内容已删除
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4楼2010-11-13 17:40:36
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 375433261 at 2010-11-13 15:59:37:
应该不是电压的问题，我就是用这样的电压跑的 ，跑出的条带挺好的，应该是你的样品浓度太高了，或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的

15%的分离胶 配方是按分子生物手册上配的肯定没问题，样品浓度高会导致弥散吗？
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5楼2010-11-13 17:51:23
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hwamg at 2010-11-13 16:36:06:
弥撒是不是你的交联剂temed有问题或配比当啊 电压我们浓缩80v  分离胶120v

TE是买的现成的，应该没有问题，配比是按分子生物手册上配的，没有问题啊。
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6楼2010-11-13 17:53:10
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by piaopiao233 at 2010-11-15 14:01:36:
是多大的蛋白质啊，要用到这个浓度的胶吗？

分子量大概在20kd-30kd。
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11楼2010-11-15 17:07:19
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 一夜不留痕 at 2010-11-15 12:49:36:
兄弟 你跑的是不是tricine胶 也就是三层胶呀  如果是的话 可能是负极电泳液弄错了  PH出问题了或者是没有加SDS

不是啊，我的两层胶，分离胶和浓缩胶~
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12楼2010-11-15 17:14:25
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wyf10071121 at 2010-11-15 13:28:09:
我试验的时候也出现了这样的情况，不过还好了最后不影响后续的试验啊！

那你染色后小分子量的条带能看清楚吗？
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13楼2010-11-15 17:16:44
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
rainwander:找到原因就好。我做的时候都是混合加热8-15分钟，跑之前离心1min，跑完之后染色，没问题。 2010-12-12 16:33:12
引用回帖:
Originally posted by piaopiao233 at 2010-11-16 17:16:19:
已经发现问题了，是什么原因呢？让大家都借鉴一下啊

恩，我觉得主要的问题是，我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短，平时都是3min中，这次我延长到了8分钟，这样使蛋白质和SDS充分结合，然后在上样之前我又离心了一遍，2min，最后跑的条带就很好，基本上没有弥散和拖尾了。
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19楼2010-11-16 21:09:03
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2010-11-16 19:51:22:
楼主同学 这个正常 不算弥散 样品是否弥散要染色后看你的目标条带的情况才知道 跑的时候看到的是溴酚兰 溴酚兰跑花了不代表条带跑花 在电泳中 确实也有溴酚兰从头到尾是一条细线的时候 （虽然这也不代表你的样品不 ...

恩，我今天跑的样就很好，可能就如你说的上样前离心一下效果不错。
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20楼2010-11-16 21:11:20
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jessica533 at 2010-12-03 09:13:03:
我是说不加样品的对称板放反了，反了也没什么了，并不妨碍电路，只是也许会漏缓冲液，多加点缓冲液就ok了

没有放反哦，它本来就是这样的，上面也写了这面朝里。
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34楼2010-12-03 13:06:45
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