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shyuyafeng

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题

我跑的样品是蛋白，最近跑电泳的时候，样品刚进入分离胶的时候成线状，但是过了一会就开始弥散，昨天今天都是这样，昨天浓缩胶是80v，分离胶是100v，昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题，今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题，电泳液也是新配的，

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1楼 2010-11-13 15:53:10

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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)

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引用回帖:

19楼: Originally posted by shyuyafeng at 2010-11-16 21:09:03:
恩，我觉得主要的问题是，我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短，平时都是3min中，这次我延长到了8分钟，这样使蛋白质和SDS充分结合，然后在上样之前我又离心了一遍，2min，最后跑的条带就很好， ...

能不能解释一下为什么要把样品和buffer混合后加热100度8分钟？
还有你的样品最终定量到多大浓度？每孔上样多少？能否把你现在的protocol给我发一份，我也在做SDS-PAGE。希望得到你的指点，谢谢！！
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