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shyuyafeng

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题

我跑的样品是蛋白,最近跑电泳的时候,样品刚进入分离胶的时候成线状,但是过了一会就开始弥散,昨天今天都是这样,昨天浓缩胶是80v,分离胶是100v,昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题,今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题,电泳液也是新配的,
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chemifunan

木虫 (正式写手)



shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
shyuyafeng(金币+4): 2010-11-16 21:09:16
楼主同学 这个正常 不算弥散 样品是否弥散要染色后看你的目标条带的情况才知道 跑的时候看到的是溴酚兰 溴酚兰跑花了不代表条带跑花 在电泳中 确实也有溴酚兰从头到尾是一条细线的时候 (虽然这也不代表你的样品不弥散 这两件事不是没有关系 而是没有必然的关系) 毕竟这样好看一点 我没仔细分析过这个原因和技巧 只要染色过后我要的band清楚就行了

如果各种溶液没问题的话 那我觉得和配的溴酚兰有关 溴酚兰不要上太多 母液用之前离心一下 去掉里面的沉淀物 如果还不行 看看换个电泳槽 不同的电泳槽状态不一样 冒泡的速度都不一样

但是不影响你看结果 我觉得不用搞这么紧张
18楼2010-11-16 19:51:22
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375433261

新虫 (小有名气)


★ ★
shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 16:03:39
应该不是电压的问题,我就是用这样的电压跑的 ,跑出的条带挺好的,应该是你的样品浓度太高了,或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的
2楼2010-11-13 15:59:37
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hwamg

银虫 (正式写手)



shyuyafeng(金币+1):谢谢参与
弥撒是不是你的交联剂temed有问题或配比当啊 电压我们浓缩80v  分离胶120v
3楼2010-11-13 16:36:06
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 375433261 at 2010-11-13 15:59:37:
应该不是电压的问题,我就是用这样的电压跑的 ,跑出的条带挺好的,应该是你的样品浓度太高了,或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的

15%的分离胶 配方是按分子生物手册上配的肯定没问题,样品浓度高会导致弥散吗?
5楼2010-11-13 17:51:23
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