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【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
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shyuyafeng
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[交流]
【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
我跑的样品是蛋白,最近跑电泳的时候,样品刚进入分离胶的时候成线状,但是过了一会就开始弥散,昨天今天都是这样,昨天浓缩胶是80v,分离胶是100v,昨天晚上看了点资料别人说可能是电压的问题,今天把分离胶的电压降低了还是弥散。分离胶和浓缩胶的pH没有问题,电泳液也是新配的,
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2010-11-13 15:53:10
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2009227004
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★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by
shyuyafeng
at 2010-11-16 21:09:03:
恩,我觉得主要的问题是,我的样品和buffer融合之后加热到100度这个时间有点短,平时都是3min中,这次我延长到了8分钟,这样使蛋白质和SDS充分结合,然后在上样之前我又离心了一遍,2min,最后跑的条带就很好, ...
我们一般加热都是95度10分钟。。。。
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27楼
2010-11-17 14:23:24
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375433261
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★ ★
shyuyafeng(金币
+1
):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 16:03:39
应该不是电压的问题,我就是用这样的电压跑的 ,跑出的条带挺好的,应该是你的样品浓度太高了,或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的
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2楼
2010-11-13 15:59:37
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hwamg
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★
shyuyafeng(金币
+1
):谢谢参与
弥撒是不是你的交联剂temed有问题或配比当啊 电压我们浓缩80v 分离胶120v
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3楼
2010-11-13 16:36:06
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shyuyafeng
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引用回帖:
Originally posted by
375433261
at 2010-11-13 15:59:37:
应该不是电压的问题,我就是用这样的电压跑的 ,跑出的条带挺好的,应该是你的样品浓度太高了,或者是分离胶的配方有问题 电压肯定是没问题的
15%的分离胶 配方是按分子生物手册上配的肯定没问题,样品浓度高会导致弥散吗?
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5楼
2010-11-13 17:51:23
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