应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】土壤细菌多样性，引物F357GC R518 PCR老是出问题，求救！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2126  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

superadeel

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】土壤细菌多样性，引物F357GC R518 PCR老是出问题，求救！ 已有6人参与

做土壤细菌多样性时，提的DNA用F357-GC和R518跑PCR ，能扩出来，但是条带很宽，很模糊，后续DGGE切胶，也是P出来很模糊，测序测不出来。

请问哪位大侠做过，经验分享一下，不胜感激。按理来说这个应该很容易做出来，不知道到我这里出了什么问题。

25ul体系：mix  12.5ul, 引物（10UM）各0.5uL，水10.5ul,模板1uL。（用Takara Ex tap 酶体系也做过）

程序：用touchdown，94度6分钟，94度1分钟，65-55度45秒（一循环降0.5度），72度45秒，20循环。后15个循环是94度1分钟，55度45秒，72度45秒。最后延伸10分钟。

[ Last edited by superadeel on 2010-9-28 at 16:58 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

土壤微生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-28 16:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
土壤DNA采用自己配的试剂提取后采用DNA纯化试剂盒纯化一下就可以了。
PCR MIX扩增的DNA。
程序跟你的差不多也是降落PCR，PCR扩增程序应该没有问题。
依据你的DNA提取的浓度来决定DNA用量吧，如果DNA浓度很高，加1uL也可以，如果浓度低，就加2uL甚至更多。
引用回帖:
Originally posted by superadeel at 2010-09-29 12:03:57:

能不能告诉我，你土壤ＤＮＡ是试剂盒提的还是手提，用的ＭＩＸ还是别的什么，程序是怎么样的，大侠希望你帮帮忙，我做了一个多月了，老是跑出来很宽很模糊的条带，不知道你能不能说具体点，　　　关于多加点ＤＮ ...

赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-09-30 09:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

tsq0126

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
急切看到回复，我也是遇到相同的问题，哪位做过的仁兄给点建议和意见
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-28 17:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superadeel

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by tsq0126 at 2010-09-28 17:06:31:
急切看到回复，我也是遇到相同的问题，哪位做过的仁兄给点建议和意见

你是哪里的？
回复此楼
3楼2010-09-28 20:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流


扩增出这样的产物就可以做DGGE了。再试试，DNA多加一些，用2 uL。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-29 11:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +8 15188958825 2026-03-25 8/400 2026-03-29 01:36 by fmesaito
[考研] 305求调剂 +7 RuiFairyrui 2026-03-28 7/350 2026-03-29 00:40 by 544594351
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-28 3/150 2026-03-28 23:58 by wxiongid
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 7/350 2026-03-28 21:40 by zhq0425
[考研] 322求调剂 +5 旧吢 2026-03-24 5/250 2026-03-28 13:26 by Iveryant
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 292求调剂 +14 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 15/750 2026-03-28 08:45 by WYUMater
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 复试调剂，一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭