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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带
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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

[交流] 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带已有27人参与

模板用基因组DNA，引物碱基数25，GC含量为64和56，Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58  60  63  65  66  68
酶试过rTaq   ExTaq   还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体，有时出现估计几十K但很弱的条带（接近上样孔的地方），有时什么都没


很郁闷，很无助


问题在哪里呀？
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每天进步一点点，持之以恒！
1楼2010-08-27 10:26:31
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lfkey at 2010-08-27 16:32:23:
温度太低特异性会减弱，我觉得不能低于60度，引物可以少加点，另外摸索退火温度时间隔可以再小点；重新设计引物到可以考虑一下。检测能否扩增出条带的话，我觉得应该没有酶或者buffer的事。

buffer也很重要，提供良好的环境必不可少
赞一下(1人) 回复此楼
倚楼听风雨，淡看江湖路！
30楼2010-09-09 13:44:10
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