应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
191/2返回列表12下一页
查看: 2799  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊 已有10人参与

这是我设计的引物，前引物：5-GGG AAA TCT AGA CTC GTA GTA TCG GTT G-3其中TCT AGA是酶切位点，后引物：5-GG GTT GAT  CAG GAT CCC GTG -3，其中GGATCC是酶切位点，我的序列中包括酶切位点，PCR之后，琼脂糖凝胶电泳的条带很弱，再做酶切之后，就没有条带了，我是做PCR之后，酶切，连接，做感受态细胞的转化，请教各位高手是不是我引物设计的有问题，谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-22 10:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lly198784

木虫 (正式写手)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
应该不是引物的问题，因为你PCR出来了，看看是不是PCR体系的问题！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-06-22 11:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buster

新虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
会不会是酶切的问题呢。pcr之后条带很弱，酶切体系控制不好的话，没有条带很正常呢。为什么不多P几管合一起纯化后再酶切呢
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-22 11:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)
★ ★
hutingting(金币+3):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):很热心~~ 2010-06-22 13:57:43
你需要解决如下几个问题：1、带是否确信是你需要的条带？巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增；调整扩增温度；调整PCR体系；（不推荐二次PCR）。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够，或者是否合适?查一下PCR实验指南上面好像有一个大表，对每一个酶都有说明。4、感受态是否质量足够好？做一下检测，参照坛子里面相关内容。

[ Last edited by ququr008 on 2010-6-22 at 12:43 ]
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-06-22 12:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xieweitian

铜虫 (小有名气)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
我也是来学习来的。
赞一下(1人) 回复此楼
520-1314
5楼2010-06-22 13:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ququr008 at 2010-06-22 12:41:56:
你需要解决如下几个问题：1、带是否确信是你需要的条带？巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增；调整扩增温度；调整PCR体系；（不推荐二次PCR）。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够，或者是否 ...

谢谢啦
回复此楼
6楼2010-06-22 14:09:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lly198784 at 2010-06-22 11:22:08:
应该不是引物的问题，因为你PCR出来了，看看是不是PCR体系的问题！

谢谢啊
回复此楼
7楼2010-06-22 14:09:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lly198784 at 2010-06-22 11:22:08:
应该不是引物的问题，因为你PCR出来了，看看是不是PCR体系的问题！

谢谢啦
回复此楼
8楼2010-06-22 14:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
模板是什么？？
回复此楼
9楼2010-06-22 18:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
引物酶切位点最好靠近5‘端，要加保护碱基
PCR之后，如果琼脂糖凝胶电泳的条带很弱，完全没别要再酶切，连接，感受态细胞的转化。
建议重新设计引物！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-06-22 21:10:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hutingting 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +12 稻妻小编 2026-03-26 12/600 2026-03-29 01:04 by 我是小康
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +4 Shern—- 2026-03-28 4/200 2026-03-29 00:47 by 544594351
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +7 幸运哩哩 2026-03-22 11/550 2026-03-28 20:27 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +10 Micky11223 2026-03-25 14/700 2026-03-28 15:48 by Micky11223
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭