24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2809  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计出来了,但酶切之后电泳没条带啊 已有10人参与

这是我设计的引物,前引物:5-GGG AAA TCT AGA CTC GTA GTA TCG GTT G-3其中TCT AGA是酶切位点,后引物:5-GG GTT GAT  CAG GAT CCC GTG -3,其中GGATCC是酶切位点,我的序列中包括酶切位点,PCR之后,琼脂糖凝胶电泳的条带很弱,再做酶切之后,就没有条带了,我是做PCR之后,酶切,连接,做感受态细胞的转化,请教各位高手是不是我引物设计的有问题,谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lly198784 at 2010-06-22 11:22:08:
应该不是引物的问题,因为你PCR出来了,看看是不是PCR体系的问题!

谢谢啦
8楼2010-06-22 14:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

lly198784

木虫 (正式写手)


hutingting(金币+3):谢谢参与
应该不是引物的问题,因为你PCR出来了,看看是不是PCR体系的问题!
2楼2010-06-22 11:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buster

新虫 (初入文坛)


hutingting(金币+3):谢谢参与
会不会是酶切的问题呢。pcr之后条带很弱,酶切体系控制不好的话,没有条带很正常呢。为什么不多P几管合一起纯化后再酶切呢
3楼2010-06-22 11:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)

★ ★
hutingting(金币+3):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):很热心~~ 2010-06-22 13:57:43
你需要解决如下几个问题:1、带是否确信是你需要的条带?巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增;调整扩增温度;调整PCR体系;(不推荐二次PCR)。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够,或者是否合适?查一下PCR实验指南上面好像有一个大表,对每一个酶都有说明。4、感受态是否质量足够好?做一下检测,参照坛子里面相关内容。

[ Last edited by ququr008 on 2010-6-22 at 12:43 ]
4楼2010-06-22 12:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 348求调剂 +5 小懒虫不懒了 2026-03-28 5/250 2026-03-29 10:34 by 唐沐儿
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分,求调剂 +5 0857求调剂. 2026-03-24 6/300 2026-03-28 22:04 by zhq0425
[考研] 压国家一区线,求导师收留,有恩必谢! +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分,前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 0703化学338求调剂! +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +5 SYA! 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
信息提示
请填处理意见