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hutingting

银虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊已有10人参与

这是我设计的引物，前引物：5-GGG AAA TCT AGA CTC GTA GTA TCG GTT G-3其中TCT AGA是酶切位点，后引物：5-GG GTT GAT CAG GAT CCC GTG -3，其中GGATCC是酶切位点，我的序列中包括酶切位点，PCR之后，琼脂糖凝胶电泳的条带很弱，再做酶切之后，就没有条带了，我是做PCR之后，酶切，连接，做感受态细胞的转化，请教各位高手是不是我引物设计的有问题，谢谢啦

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1楼 2010-06-22 10:08:51

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ququr008

金虫 (小有名气)

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专业: 心脑血管药物药理

★ ★
hutingting(金币+3):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):很热心~~ 2010-06-22 13:57:43

你需要解决如下几个问题：1、带是否确信是你需要的条带？巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增；调整扩增温度；调整PCR体系；（不推荐二次PCR）。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够，或者是否合适?查一下PCR实验指南上面好像有一个大表，对每一个酶都有说明。4、感受态是否质量足够好？做一下检测，参照坛子里面相关内容。

[ Last edited by ququr008 on 2010-6-22 at 12:43 ]