应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2807  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊 已有10人参与

这是我设计的引物，前引物：5-GGG AAA TCT AGA CTC GTA GTA TCG GTT G-3其中TCT AGA是酶切位点，后引物：5-GG GTT GAT  CAG GAT CCC GTG -3，其中GGATCC是酶切位点，我的序列中包括酶切位点，PCR之后，琼脂糖凝胶电泳的条带很弱，再做酶切之后，就没有条带了，我是做PCR之后，酶切，连接，做感受态细胞的转化，请教各位高手是不是我引物设计的有问题，谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-06-22 10:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
引物酶切位点最好靠近5‘端，要加保护碱基
PCR之后，如果琼脂糖凝胶电泳的条带很弱，完全没别要再酶切，连接，感受态细胞的转化。
建议重新设计引物！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-06-22 21:10:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

lly198784

木虫 (正式写手)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
应该不是引物的问题，因为你PCR出来了，看看是不是PCR体系的问题！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-06-22 11:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buster

新虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
会不会是酶切的问题呢。pcr之后条带很弱，酶切体系控制不好的话，没有条带很正常呢。为什么不多P几管合一起纯化后再酶切呢
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-22 11:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)
★ ★
hutingting(金币+3):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):很热心~~ 2010-06-22 13:57:43
你需要解决如下几个问题：1、带是否确信是你需要的条带？巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增；调整扩增温度；调整PCR体系；（不推荐二次PCR）。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够，或者是否合适?查一下PCR实验指南上面好像有一个大表，对每一个酶都有说明。4、感受态是否质量足够好？做一下检测，参照坛子里面相关内容。

[ Last edited by ququr008 on 2010-6-22 at 12:43 ]
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-06-22 12:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +12 稻妻小编 2026-03-26 12/600 2026-03-29 01:04 by 我是小康
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +4 26要上岸 2026-03-28 4/200 2026-03-28 15:30 by 1018329917
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-27 5/250 2026-03-28 14:25 by 唐沐儿
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿吉大071010，316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭