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关于连接转化的问题 已有1人参与
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酶切800bp的片段连接5800bp的载体，酶切4000bp的片段连接5800bp的载体，连接完了用T7通用引物来p，能够p出来，然后用连接体系去转化，平板什么也不长，我用提好的别的质粒做对照，长满了一平板，求助我这是什么问题，做了三个月的连接转化了，再做不出来就想换课题了，求各位大神帮我分析是哪里出了问题 发自小木虫IOS客户端 |
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jcstone1027
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-17 07:45:47
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-17 07:45:47
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就是说你PCR验证的时候就是用通用引物和序列引物验的吗，如果是这样的话，那就可以排除酶切的问题了，实际上我觉得你还是需要提高片段浓度，比例这些没那么严格，我之前出过问题，罕见的是连接酶有问题，连接效率过低，因为PCR很灵敏，扩出来不代表一定能转化出来，所以就是浓度，还有可以考虑下连接酶的问题。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-06-16 16:14:18
jcstone1027
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kangaroo0513
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5楼2017-06-16 22:14:08
