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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因总是p不出来
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max小线

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因总是p不出来 已有2人参与

最近在p苎麻的两个基因，大小2000左右，换过三次引物，60-50℃之间的温度试了个遍，cDNA也换过新的，可是就是很难p出来，唯二的两次p出有一点点淡条带，一次是引物没稀释，一次是taq酶的加了1ul，但是胶回收都失败了，已经快崩溃了，求助万能的虫友

基因总是p不出来


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1楼 2017-06-11 22:02:54
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dna1998

铁虫 (著名写手)
2000bp最好用takara的LA Taq酶

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2楼2017-06-11 22:48:37
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dna1998

铁虫 (著名写手)
循环数可以增加

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3楼2017-06-11 22:49:47
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270782719

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-12 23:04:37
考虑用换扩增效率高的Taq或GC buffer全基因合成

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4楼2017-06-12 07:24:24
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-12 23:05:00
用好的酶，循环数增加，检查引物有没有错，RNA在反转前一定要电泳验证，用DNA模板试一下。

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5楼2017-06-12 16:38:39
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吕玉平

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议：换一种高效率的Taq酶试一下；可以用基因组扩增一下是否有产物，大小是否正确，这样就能确定引物是否有问题了；cDNA反转后测一下浓度检测一下含量，跑个电泳检测一下质量，根据浓度计算具体需要多大体积的cDNA了。加油。
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每天的目标就是过的充实
6楼2017-06-14 15:30:55
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矮腿妹的烦恼

新虫 (初入文坛)
用高保真酶吧，扩大片段

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7楼2017-06-14 17:05:49
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