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max小线

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因总是p不出来 已有2人参与

最近在p苎麻的两个基因,大小2000左右,换过三次引物,60-50℃之间的温度试了个遍,cDNA也换过新的,可是就是很难p出来,唯二的两次p出有一点点淡条带,一次是引物没稀释,一次是taq酶的加了1ul,但是胶回收都失败了,已经快崩溃了,求助万能的虫友

基因总是p不出来


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dna1998

铁虫 (著名写手)

2楼2017-06-11 22:48:37
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dna1998

铁虫 (著名写手)

3楼2017-06-11 22:49:47
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270782719

新虫 (小有名气)



西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-12 23:04:37
考虑用换扩增效率高的Taq或GC buffer全基因合成

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4楼2017-06-12 07:24:24
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-12 23:05:00
用好的酶,循环数增加,检查引物有没有错,RNA在反转前一定要电泳验证,用DNA模板试一下。

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5楼2017-06-12 16:38:39
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吕玉平

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议:换一种高效率的Taq酶试一下;可以用基因组扩增一下是否有产物,大小是否正确,这样就能确定引物是否有问题了;cDNA反转后测一下浓度检测一下含量,跑个电泳检测一下质量,根据浓度计算具体需要多大体积的cDNA了。加油。
每天的目标就是过的充实
6楼2017-06-14 15:30:55
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矮腿妹的烦恼

新虫 (初入文坛)

7楼2017-06-14 17:05:49
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