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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于重组质粒测序问题
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雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] 关于重组质粒测序问题 已有6人参与

求助大神：目前重组质粒已经构建，做过菌落PCR可以p出我的目的基因，提质粒也可以提出来是重组质粒的大小，但是每次交由测序公司测序重构质粒中的目的基因总是测不出来，求大神解答
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向着前方迈进
1楼 2015-01-29 20:25:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 2015-01-29 23:09:31
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:10:00
把挑单克隆的一次送两个或三个去测序，必要的话把引物也送去，如果还不对就是你P错了。
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永远相信未知的总是美好的！
2楼2015-01-29 21:32:16
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普通回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能不能是污染了菌液啊，还是你的挑点个数太少了啊
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-29 21:36:12
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maila
4楼2015-01-30 07:39:32
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雪中花sml

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zshw_001 at 2015-01-29 21:32:16
把挑单克隆的一次送两个或三个去测序，必要的话把引物也送去，如果还不对就是你P错了。

送测反馈回来信号微弱
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向着前方迈进
5楼2015-02-01 13:31:23
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骆驼人

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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雪中花sml(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-02 21:05:53
重新连接转化吧，还有多挑几个单克隆，做菌液PCR，条带单一的样品再送测序，
听师兄师姐们说可以通用引物和特意引物混搭着P，只是没有尝试过
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愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
6楼2015-02-01 16:25:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试换个测序引物测序。
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7楼2015-02-02 12:39:20
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雪中花sml

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 骆驼人 at 2015-02-01 16:25:21
重新连接转化吧，还有多挑几个单克隆，做菌液PCR，条带单一的样品再送测序，
听师兄师姐们说可以通用引物和特意引物混搭着P，只是没有尝试过

这样P，没有听说过哎
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向着前方迈进
8楼2015-02-02 19:17:09
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海上余辉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是用通用引物p的吗？测序测不出来是哪种情况，无信号还是信号中断，或者是测出的序列不是你的目的基因？测序公怎么跟你解释的？

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2015-02-02 21:02:02
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雪中花sml

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 海上余辉 at 2015-02-02 21:02:02
你是用通用引物p的吗？测序测不出来是哪种情况，无信号还是信号中断，或者是测出的序列不是你的目的基因？测序公怎么跟你解释的？

不是通用引物，目前用的质粒还没有通用引物可用，是自备的引物
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向着前方迈进
10楼2015-02-03 11:02:55
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