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雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] 关于重组质粒测序问题 已有6人参与

求助大神:目前重组质粒已经构建,做过菌落PCR可以p出我的目的基因,提质粒也可以提出来是重组质粒的大小,但是每次交由测序公司测序重构质粒中的目的基因总是测不出来,求大神解答
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向着前方迈进
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 2015-01-29 23:09:31
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-29 23:10:00
把挑单克隆的一次送两个或三个去测序,必要的话把引物也送去,如果还不对就是你P错了。
永远相信未知的总是美好的!
2楼2015-01-29 21:32:16
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普通回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能不能是污染了菌液啊,还是你的挑点个数太少了啊
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-29 21:36:12
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4楼2015-01-30 07:39:32
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雪中花sml

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zshw_001 at 2015-01-29 21:32:16
把挑单克隆的一次送两个或三个去测序,必要的话把引物也送去,如果还不对就是你P错了。

送测反馈回来信号微弱
向着前方迈进
5楼2015-02-01 13:31:23
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骆驼人

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
雪中花sml(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-02 21:05:53
重新连接转化吧,还有多挑几个单克隆,做菌液PCR,条带单一的样品再送测序,
听师兄师姐们说可以通用引物和特意引物混搭着P,只是没有尝试过
愿你,温柔又坚定,不轻易许诺但许的诺一定会实现,有勇气有力量,会发现一切美好的事物
6楼2015-02-01 16:25:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试换个测序引物测序。
7楼2015-02-02 12:39:20
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雪中花sml

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 骆驼人 at 2015-02-01 16:25:21
重新连接转化吧,还有多挑几个单克隆,做菌液PCR,条带单一的样品再送测序,
听师兄师姐们说可以通用引物和特意引物混搭着P,只是没有尝试过

这样P,没有听说过哎
向着前方迈进
8楼2015-02-02 19:17:09
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海上余辉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是用通用引物p的吗?测序测不出来是哪种情况,无信号还是信号中断,或者是测出的序列不是你的目的基因?测序公怎么跟你解释的?

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-02-02 21:02:02
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雪中花sml

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 海上余辉 at 2015-02-02 21:02:02
你是用通用引物p的吗?测序测不出来是哪种情况,无信号还是信号中断,或者是测出的序列不是你的目的基因?测序公怎么跟你解释的?

不是通用引物,目前用的质粒还没有通用引物可用,是自备的引物
向着前方迈进
10楼2015-02-03 11:02:55
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