| 查看: 2725 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
houchenxi金虫 (初入文坛)
|
[求助]
pcr电泳条带弥散
|
|
|
想要p出一个4kb的目的基因，一直p不出来，请大神帮帮忙 我用的cDNA是从RPE细胞内提取出来的，用的聚合酶是方塔高保真酶 体系如下（单位：微升）： 灭菌miniQ：2.8 模板cDNA：2 5*enhancer：2 5*SFbuffer：2 引物1: 0.4 引物2： 0.4 dNTPmix：0.2 方塔高保真酶：0.2 其中引物都稀释到10vm， 温度设置： 预变性 95度 2min 变性 95度 10s 退火 50~69 都试过 20s 延伸 72度 2min 彻底延伸 72度 10min 中间三个步骤30个cycle 跑胶结果是弥散的（图一）： 为了证明我的体系是没错的，我用师兄的引物，其他都用我自己的做了一次，发现是能够p出来的（图二） 之后为了证明引物没有降解，我使用琼脂糖凝胶电泳（1%，加4微升EB），引物：10*loading buffer：dd水=2:1:7.跑了10分钟，marker右边两个是现在在用的引物（图三）。 引物已经重新设计过一遍了，连接片段和文献上的相同， 其实刚开始还是有非特异性条带的（图四），现在连非特异性的都没了，实在不知道为什么  请大神们指教  图一.jpg  图二.jpg  图三.jpg  图四.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
基金申报
已经有4人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有9人回复
-
溴的反应液脱色
已经有6人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
-
推荐一本书
已经有10人回复
-
参与限项
已经有5人回复
-
有没有人能给点建议
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR电泳图
已经有7人回复
- pcr条带弥散
已经有4人回复
- PCR电泳条带为什么会这样？（附图）
已经有10人回复
- RNA 经过DNaseI 消化后条带都弥散 不消化 直接反转录 PCR有条带 不确定是不是cDNA
已经有1人回复
- 【求助/交流】RT-PCR电泳呈现弥散状
已经有5人回复
- 酶切后电泳条带发生了弥散
已经有6人回复
- ＰＣＲ产物电泳时出现弥散现象
已经有0人回复
- 昆虫基因PCR后电泳条带淡，急求帮助？？？？
已经有4人回复
- PCR产物电泳，条带弥散的原因
已经有16人回复
- 大家帮我看看我最近做的pcr电泳图
已经有4人回复
- 琼脂糖凝胶电泳的条带问题
已经有2人回复
- 老师也解答不了的未知电泳条带太神奇了 只能求高人解答~~~~~
已经有4人回复
- DNA提取测序，DNA提取后，电泳条带弥散拖尾
已经有7人回复
- CBF1基因扩增出的电泳条带为什么不是一条带？
已经有8人回复
- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR产物电泳条带弥散？？？
已经有30人回复
- 电泳条带很粗---怎么回事？
已经有2人回复
houchenxi
金虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 806.9
- 帖子: 31
- 在线: 18.3小时
- 虫号: 3465823
- 注册: 2014-10-10
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
3楼2017-03-31 09:20:48
2楼2017-03-30 23:26:37
houchenxi
金虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 806.9
- 帖子: 31
- 在线: 18.3小时
- 虫号: 3465823
- 注册: 2014-10-10
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
4楼2017-04-07 10:49:11