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琼脂糖凝胶电泳的条带问题
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PCR产物跑胶结果为什么会呈弥散状，弥散后却还有目的条带（前四个是一种，后四个是另一种）。跑过两次了都差不多。以为是退火温度过低，这次的退火温度从上次的60升到了65。还是如此，我的模板时cDNA我也跑了个胶，是图中第二个Marker后面的，居然没有条带不知道是为什么。还请高手指点啊！感激不尽。 |
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reallpf
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励新虫交流 2012-07-17 17:51:45
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PCR电泳后条带弥散，一片亮带的原因可能有： 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg 2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数 因为你的模版cDNA根本没有跑出条带，所以个人推测你的模板降解严重。因此建议你重新做出纯的模板，分成几份，常用的4度保存；其它-20度保存。 另外，造成你图中所示的电泳结果还可能是电泳的问题，但这个可能性很小。 不过针对这点建议你跑电泳时常更换电泳液，防止核酸酶，杂DNA污染，另外控制好电泳的电压，不要过大。还有你的PCR产物要放置4度，不要放室温后再跑电泳。要么电泳结束马上电泳，要么冰箱4度保存。 |
2楼2012-07-17 17:47:35
3楼2018-03-29 14:19:20
