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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 老师也解答不了的未知电泳条带太神奇了 只能求高人解答~~~~~
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gmg666

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师也解答不了的未知电泳条带太神奇了 只能求高人解答~~~~~

我首先简单的叙述一下
最左边的孔槽是marker
左边数的第二个孔槽（包括上面的小胶和下面的大胶）内点的样来自两个EP管
这两个不同的EP管其实是 用一个EP管做的50ul的体系 然后在PCR之前被平均分到两个EP管内来进行的  防止一个扩不出来 备用的 也就说里面的加的物质在做PCR之前是一模一样的

但是结果跑完电泳 下面大胶上 在230左右多出现了一条带 确实解释不清楚

老师怀疑是点样的时候染菌了  我觉得不太可能 毕竟长度只有230bp

http://muchong.com/html/200911/1693852.html
看到一个帖子根本我情况一模一样  求解释啊 ?????

培养后的菌液提取质粒跑电泳 我也是弥散的  找不到相应的条带
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1楼 2012-06-06 22:10:38
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hgh2012

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+3, 这种解释还得需要实验来验证才行，否则只能是假设，欢迎常来交流 2012-06-07 09:28:37
gmg666: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 长见识了 第二次跑电泳 经验不足还请多多指教 2012-06-07 21:39:12
这不难解释，毕竟在扩增过程中，我们还是看不到，很难控制的，有好多可变因素在，根据你的结果，大胶上的出现一个新条带，但注意重组质粒明显变弱很多，这就是原因所在，我认为是引物不佳，出现非特异性扩增，就像RAPD一样，也可能是其中一条引物的扩增结果。这事更奇我都遇到过。
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工作是为了生存
2楼2012-06-07 06:19:27
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 欢迎常来交流 2012-06-07 09:28:46
本帖仅楼主可见
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3楼2012-06-07 06:46:30
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liuyancheng

新虫 (初入文坛)
你提到了分装了一下 问题有可能出现在这里  混合不均 从而造成成分发生变化
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4楼2014-08-13 17:40:28
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flyingsky305

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hgh2012 at 2012-06-07 06:19:27
这不难解释，毕竟在扩增过程中，我们还是看不到，很难控制的，有好多可变因素在，根据你的结果，大胶上的出现一个新条带，但注意重组质粒明显变弱很多，这就是原因所在，我认为是引物不佳，出现非特异性扩增，就像R ...

我同意。除了引物可能不够特异，退火温度不合适和聚合酶质量不够好也是可能的。另外，模板要稀释10到50倍，以PCR后看不到模板为准。还可以尝试在反应体系中加4、8或12％ DMSO

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-08-13 20:32:09
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